论著

• 过表达HAC1提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中分泌表达

  王庆庆;高庆华;罗同阳;董聪;王玥;刘小娜;唐兆宏;贾振华;

  [目的]旨在提高重组葡萄糖氧化酶(GOD)在毕赤酵母中的表达。[方法]将构建的表达载体pPICZB-HAC1、pPICZB-Hrd1、pPIC3.5K-Ubc1线性化后，电击转化青霉葡萄糖氧化酶毕赤酵母感受态细胞，用含有50μg/mL Zeocin或200μg/mL G418的YPD平板筛选阳性转化子。阳性转化子进行试管诱导培养，筛选得到1株高产重组菌；在此基础上进行10 L发酵罐培养时，外源添加氯化血红素来提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量。[结果]在试管水平筛选过表达转录激活因子HAC1、下游分子伴侣Hrd1和Ubc1的重组菌株，相比出发菌株酶活分别提高了56.46%、43.51%和48.02%,其中过表达HAC1重组青霉葡萄糖氧化酶菌株在10 L发酵罐酶活达到1 308 U/mL。[结论]通过过表达HAC1或者分子伴侣可以辅助蛋白正确折叠，其中过表达HAC1菌株表达的葡萄糖氧化酶酶活最高，将酶活提高了86%。

  2024年05期 v.34;No.204 537-542页 [查看摘要][在线阅读][下载 1318K]
  

• PSMC4表达下调促进MEF细胞衰老

  骆诗凌;谢健鸿;吴世裕;曾芷彤;刘新光;袁源;

  [目的]探讨PSMC4表达下调对小鼠胚胎成纤维(Mouse Embryonic Fibroblast, MEF)细胞衰老的影响。[方法]利用小干扰RNA(siRNA)敲低PSMC4,荧光定量PCR和Western Blotting验证siRNA的敲低效果；通过β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况；通过EdU检测细胞增殖；通过酶联免疫吸附法检测26S蛋白酶体活性。[结果]下调PSMC4后β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数量明显增加，EdU细胞增殖率降低约2.7倍(P<0.01),26S蛋白酶体活性降低约1.6倍(P<0.01)。[结论]PSMC4表达下调通过降低26S蛋白酶体活性抑制MEF细胞增殖，进而促进MEF细胞衰老。

  2024年05期 v.34;No.204 543-547页 [查看摘要][在线阅读][下载 1930K]
  

技术与方法

• 响应面法优化鼠细小病毒悬液制备及滴度测定

  郭慧;是翡;史云凤;王闽佳;吴玮;李冬梅;

  [目的]研究鼠细小病毒(MMV)感染性滴度测定方法，同时制备高滴度的MMV。[方法]通过Box-Behnken设计-响应面法优化A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。[结果]A9细胞的最佳接种浓度、病毒培养时间及病毒吸附时间分别为9×10~3个/孔、12 d及0 h,所建立的检测方法精密性较好；A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清，且随病毒MOI值的升高而逐渐增加，在MOI为0.5时，感染后72 h收获，病毒滴度最高。[结论]Box-Behnken设计-响应面法适用于A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。制备的病毒液的平均滴度为6.35TCID_(50)/0.1 mL。

  2024年05期 v.34;No.204 548-554+581页 [查看摘要][在线阅读][下载 2583K]
  

• 虚拟筛选cGAS-STING通路干预剂

  黄鹤阳;浦飞飞;夏平;冯晶;

  [目的]利用层级虚拟筛选策略发掘潜在的cGAS-STING通路的干预剂。[方法]根据Human STING蛋白的结构特点，采用Virtual Screening Workflow模块进行虚拟筛选，选取Life Chemicals 50K Diversity Library(LC-50,含5万个化合物)和MCE Bioactive Compound Library Plus(MCE Library,含1.87万个化合物)作为配体库，并利用Glide模块进行分子对接筛选cGAS-STING通路的干预剂。[结果]分别从两个化合物库中筛选出对接分数绝对值最高的200个化合物，并综合脂水分配系数和拓扑极性表面积选出5个优选先导化合物F6286-0567、F6548-0970、F5098-0465、HY-N7269、HY-N0165,其对接分数分别为-11.097、-10.548、-6.237、-6.146、-5.959。脂水分配系数分别为3.57、3.97、4.08、3.61、3.74。拓扑极性表面积分别为76.29、80.13、75.19、82.19、69.72。[结论]筛选出的干预剂F6286-0567、F6548-0970、F5098-0465、HY-N7269、HY-N0165,在保证与Human STING蛋白的结合效果理想的同时，具有更好的细胞膜通过性和脂溶性，可能成为cGAS-STING通路潜在干预剂。

  2024年05期 v.34;No.204 555-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 3100K]
  

• 过敏性鼻炎外周血单个核细胞基因与治疗中药分析

  马伟;丁乐;陈立早;黄玲;韩依伦;卢小叶;

  [目的]基于生物信息学方法分析过敏性鼻炎(Allergic Rhinitis, AR)外周血单个核细胞关键基因及通路，并进行治疗中药的关联分析。[方法]分析GSE50223芯片过敏性鼻炎患者外周血单个核细胞差异基因，利用差异基因进行功能、通路与机制的富集分析，筛选出关键靶点并关联相关治疗中药，对干预关键靶点的治疗中药进行性味归经及功效分析。[结果]GSE50223芯片分析获得差异靶点基因684个。差异基因对AR的调控作用主要与TLRs信号通路、PPAR信号通路、IL-17信号通路等相关关键靶点获得10个，分别为CCNA2、TOP2A、CCNB2、CDC20、CDCA8、KIF11、KIF20A、BUB1、CCNB1及KIF2C。关联中药获得153种，其中苦杏仁与红芪关联频数最高。关联中药以寒性与温性为主，以甘味与辛味居多，入足厥阴肝经、手太阴肺经中药居多，以清热药与补虚药占比较大。[结论]基于生信分析发现10个AR中差异表达关键基因，涉及免疫系统、细胞周期、止血等通路机制，筛选出苦杏仁、红芪、艾叶、白果等可能预防和治疗过敏性鼻炎的潜在药物，为AR的分子发病机制和遣方用药提供数据支持。

  2024年05期 v.34;No.204 566-575+565页 [查看摘要][在线阅读][下载 6150K]
  

开发与应用

• miR-143-3p靶向调控HNRNPC抑制鼻咽癌的体外转移活性

  张玉琼;符蓉;曹斌;

  [目的]探讨miR-143-3p与HNRNPC在鼻咽癌细胞中的相互作用关系。[方法]将鼻咽癌细胞分为4组：miR NC组、miR-143-3p mimic组、pcDNA3.1 NC组和pcDNA3.1 HNRNPC组。用结晶紫染色检测单克隆形成数目、流式细胞术检测细胞凋亡情况，同时RT-PCR和免疫组化实验测定miR-143-3p、HNRNPC的表达水平，蛋白免疫印迹法测定HNRNPC蛋白的表达水平。用生信学方法预测miR-143-3p与HNRNPC的结合位点，荧光素酶报告基因检测miR-143-3p对CNE2细胞HNRNPC活性的调控作用。[结果]miR-143-3p在鼻咽癌组织中的表达水平显著降低(1.25±0.03 vs 3.67±0.06),然而HNRNPC在鼻咽癌组织的表达水平升高(1.32±0.05 vs 0.46±0.03)。此外，miR-143-3p能够靶向抑制HNRNPC表达。在鼻咽癌细胞系中，miR-143-3p mimic处理完细胞之后，鼻咽癌细胞增殖能力受到抑制(58.15±7.28 vs 13.27±3.56),凋亡增加(9.05±0.28 vs 30.07±1.59)%。pcDNA3.1 HNRNPC处理完细胞之后，鼻咽癌细胞增殖能力提高(61.22±5.38 vs 113.57±5.87),凋亡减少(9.33±0.08 vs 5.01±0.09)%。[结论]miR-143-3p在鼻咽癌组织中低表达，miR-143-3p通过靶向作用HNRNPC进而抑制鼻咽癌细胞的生长，并促进鼻咽癌细胞凋亡。

  2024年05期 v.34;No.204 576-581页 [查看摘要][在线阅读][下载 2143K]
  

• miR-548o-3p负反馈失调致宫颈癌紫杉醇抗性的机制

  陈娜;崔建涛;高娜;张玉丽;陈秀英;李晓丹;卞欣;张士表;

  [目的]探讨宫颈癌紫杉醇抗性形成的潜在机制。[方法]紫杉醇浓度从0.001μmol/L逐渐递增至0.1μmol/L处理Hela细胞超过12个月进行Hela紫杉醇抗性细胞(Hela/TR)的筛选。检测Hela与Hela/TR细胞的细胞活力、凋亡水平、细胞周期和肿瘤干细胞水平。紫杉醇处理后，检测Hela与Hela/TR细胞内紫杉醇浓度。[结果]紫杉醇处理可以显著抑制Hela细胞的增殖并且诱导细胞凋亡。与Hela细胞相比，Hela/TR细胞中CD44~+细胞的比例显著增加，并且Hela/TR细胞中肿瘤干细胞标志物SOX2和ALDH1的表达水平高于Hela细胞。与Hela细胞相比，Hela/TR细胞的细胞内紫杉醇浓度明显降低(0.0759±0.0130 vs 0.0031±0.0004,t=12.52,P<0.05)。与Hela细胞相比，Hela/TR细胞中ABCC5的表达水平显著上升(0.15±0.04 vs 0.72±0.04,t=22.53,P<0.05)。敲低ABCC5后，Hela/TR细胞的细胞内紫杉醇浓度明显升高。与Hela细胞相比，Hela/TR细胞中FOXM1的表达水平上升。敲低FOXM1后，Hela/TR细胞中ABCC5的表达水平下降(0.13±0.07 vs 0.64±0.03,t=14.97,P<0.05),细胞内紫杉醇浓度明显上升。过表达miR-548o-3p后，Hela/TR细胞中FOXM1和ABCC5的水平表达下降，细胞内紫杉醇浓度明显上升(0.003±0.000 vs 0.072±0.010,t=15.43,P<0.05)。miR-548o-3p靶向FOXM1 mRNA的3′端非翻译区。过表达miR-548o-3p后，Hela/TR细胞对紫杉醇的抵抗显著下降(0.51±0.05 vs 0.10±0.01,t=17.98,P<0.05)。[结论]宫颈癌紫杉醇抗性细胞中miR-548o-3p负反馈失调导致FOXM1/ABCC5轴过度激活，提升了紫杉醇从宫颈癌细胞内的排除效率，增强了宫颈癌细胞的活力。

  2024年05期 v.34;No.204 582-588+547页 [查看摘要][在线阅读][下载 2530K]
  

• miR-127-3p下调MAPK p38抑制三阴性乳腺癌细胞转移

  刘唯唯;李卫东;张艳菊;张曼丽;

  [目的]探究miR-127-3p与MAPK p38对三阴性乳腺癌细胞转移的影响。[方法]采用免疫组化实验分析乳腺癌组织和癌旁组织中的MAPK p38表达水平。将人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞分为4组：miR NC组、miR-127-3p mimic组、si NC组和si MAPK p38组。通过CCK-8试剂检测细胞生长能力。通过实时荧光定量PCR实验检测miR-127-3p和MAPK p38表达水平。通过Transwell实验分析MDA-MB-231细胞迁移能力。通过蛋白免疫印迹实验分析MAPK p38表达水平。通过流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率。[结果]与癌旁组织样本比较，乳腺癌组织样本miR-127-3p表达水平降低(0.88±0.09 vs 0.23±0.09,P<0.05),而MAPK p38的表达水平增加。细胞实验结果显示，与miR NC组比较，miR-127-3p mimic组MDA-MB-231细胞的增殖能力和转移能力明显降低，凋亡率增加(6.02±0.08 vs 13.13±0.29,P<0.05)。与si NC组比较，si MAPK p38组MDA-MB-231细胞的增殖能力和转移能力明显降低，凋亡率增加(5.03±0.11 vs 15.03±0.92,P<0.05)。荧光素酶报告基因结果显示，miR-127-3p能够靶向调控MAPK p38表达(0.91±0.22 vs 0.25±0.13,P<0.05)。[结论]上调miR-127-3p表达能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力和转移能力，并能促进MDA-MB-231细胞凋亡。此外，miR-127-3p对MDA-MB-231细胞的这一作用与靶向抑制MAPK p38表达有关。

  2024年05期 v.34;No.204 589-594页 [查看摘要][在线阅读][下载 2185K]
  

• miR-206靶向p65-GLS1通路影响肝细胞癌增殖、迁移及侵袭

  时晓晓;董翔;于若卉;苏君君;齐东东;白杨;董猛;

  [目的]探究miR-206是否能通过靶向核因子κB p65-谷氨酰胺酶1通路来影响肝细胞癌生物学行为。[方法]采用RT-PCR检测各肝细胞癌细胞和人正常肝细胞中miR-206表达，将HepG2细胞按转染方式不同分为NC mimic组、miR-206 mimic组、NC inhibitor组、miR-206 inhibitor组，CCK-8、划痕实验、Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移、侵袭水平，RT-PCR检测细胞miR-206表达，Western Blot检测p-p65、GLS1蛋白表达，生物信息学和双荧光素酶实验分析miR-206与p65的靶向结合作用。[结果]各HepG2细胞中miR-206表达均低于HL-7702细胞，且HepG2细胞miR-206表达水平低于BEL-7402、Huh7细胞(P<0.05);与NC mimic组比较，miR-206 mimic组细胞增殖水平(1.36±0.22 vs 0.70±0.16;P<0.05)、迁移率(59.62±1.46 vs 30.14±1.13;P<0.05)%、侵袭数(202.16±13.59 vs 69.51±14.06;P<0.05)、SOD、p65、p-p65、GLS1蛋白表达降低，α-KG、Glu、MDA表达升高；与NC inhibitor组比较，miR-206 inhibitor组细胞增殖(1.41±0.19 vs 2.09±0.27;P<0.05)、迁移率(61.03±1.24 vs 75.62±2.84;P<0.05)、侵袭数(200.34±12.78 vs 268.15±16.53;P<0.05)、SOD、p65、p-p65、GLS1蛋白表达升高，α-KG、Glu、MDA表达降低(P<0.05);生物信息学及荧光素酶实验显示，p65是miR-206的靶基因。[结论] miR-206可通过抑制p65-GLS1通路(0.91±0.06 vs 0.15±0.04;P<0.05)来降低HepG2细胞谷氨酰胺代谢及氧化应激水平，从而抑制其增殖、迁移和侵袭能力。

  2024年05期 v.34;No.204 595-601页 [查看摘要][在线阅读][下载 1388K]
  

• GPR109A调控短链脂肪酸摄入对结直肠癌细胞增殖的作用

  单琳堃;李丹;徐英春;贾文焯;李义龙;

  [目的]探讨GPR109A介导的短链脂肪酸摄入对结直肠癌细胞增殖的潜在机制。[方法]纳入2020年9月-2023年1月收治的结直肠癌患者45例以及相同例数的同时期体检的健康志愿者，收集结直肠癌患者和健康志愿者的粪便并提取短链脂肪酸(SCFAs)。不同来源的SCFAs处理后检测结直肠癌细胞HCT116或HT29的增殖水平。检测不同来源SCFAs中PA、BA、ISO-BA、2M-BA的水平。敲低或过表达GPR109A后检测结直肠癌细胞的增殖水平以及短链脂肪酸PA、BA、ISO-BA、2M-BA的摄入水平。[结果]相比于结直肠癌患者，健康志愿者粪便中的SCFAs短链脂肪酸水平更高(174 023.38±1 435.92 vs 18 372±1 382.50,P<0.05)、抑制结直肠癌细胞效果更明显(1.41±0.08 vs 2.42±0.10,P<0.05)、使GPR109A表达水平上升更多(0.73±0.07 vs 0.30±0.02,P<0.05)。短链脂肪酸处理后结直肠癌细胞的增殖水平显著下降(2.88±0.09 vs 1.48±0.08,P<0.05)。过表达GPR109A后结直肠癌细胞的增殖水平显著下降(2.56±0.12 vs 1.22±0.08,2.64±0.11 vs 1.38±0.08,P<0.05)。过表达GPR109A后，结直肠癌细胞中短链脂肪酸水平上升(100.00±2.58 vs 350.34±37.15,P<0.05)。[结论]GPR109A介导了结直肠癌细胞中短链脂肪酸的摄入，并且摄入的短链脂肪酸PA、BA、ISO-BA、2M-BA能够显著抑制结直肠癌细胞的增殖。

  2024年05期 v.34;No.204 602-607+634-635页 [查看摘要][在线阅读][下载 2723K]
  

• Runx2、RANKL及GPR48对激素型股骨头坏死发生的预测价值

  王颖;谭春艳;熊武芳;

  [目的]探讨Runx2、RANKL及GPR48在大鼠激素型股骨头坏死组织中的表达及对发病的预测价值。[方法]将20只大鼠随机分为模型组和对照组，模型组采用肌肉注射糖皮质激素构建激素型股骨头坏死大鼠模型；建模成功后对两组行HE染色检查，采用蛋白印迹和RT-PCR法检测病灶组织中Runx2、RANKL及GPR48水平；采用logistics多元回归模型分析Runx2、RANKL及GPR48与大鼠激素型股骨头坏死组织发病的关系。[结果]模型组中可见组织细胞萎缩、细胞结构紊乱并可见细胞聚集固缩，且存明显的空骨陷窝；空骨陷窝率、股骨头组织里面的脂肪细胞最大直径方面，模型组的大鼠较对照组大鼠明显高(46.38μm±7.49μm vs 23.81μm±6.18μm; 20.93%±2.94%vs 7.67%±1.04%),而骨小梁面积方面则较对照组大鼠低(28.74%±4.53%vs 60.95%±5.07%),且差异明显(P<0.05);模型组大鼠组织中RANKL蛋白和mRNA水平明显高于对照组(5.92%±0.14%vs 1.29%±0.07%;2.89%±0.12%vs 0.21%±0.05%),Runx2、GPR48蛋白水平明显低于对照组(0.91%±0.11%vs 2.83%±0.21%;1.34%±0.12%vs 2.83%±0.09%),且差异有统计学意义(P<0.05);激素型股骨头坏死组织中高RANKL、低Runx2及低GPR48水平是应对大鼠激素型股骨头坏死组织发病的独立性威胁因素，且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]大鼠激素型股骨头坏死组织中Runx2和GPR48处于低表达，RANKL处于高表达状态，且高RANKL、低Runx2及低GPR48水平是应对大鼠激素型股骨头坏死组织发病的独立性威胁因素。

  2024年05期 v.34;No.204 608-612页 [查看摘要][在线阅读][下载 1433K]
  

• 黄芪多糖调控PI3K/AKT通路改善糖尿病大鼠肾损伤

  吴东;张庆红;何立群;杨山珊;

  [目的]探究黄芪多糖对糖尿病大鼠肾损伤的作用与机制。[方法]把大鼠随机分为：对照组、模型组、黄芪多糖组、抑制剂组。黄芪多糖组的大鼠每天给与400 mg/kg黄芪多糖灌胃处理，抑制剂组的大鼠每天给与0.175 mg/kg的Wortmannin处理，持续8w。通过HE染色和PAS染色分析肾脏病理结构和糖原含量；通过检查血清BUN、SCr、TC和TG水平分析肾功能状态；通过ELISA试验检查血清炎症因子水平；通过TUNEL染色分析肾小球细胞凋亡率；通过蛋白免疫印迹试验分析肾脏组织PI3K/AKT通路蛋白表达水平。[结果]与糖尿病肾病组的大鼠比较，黄芪多糖和Wortmannin处理后，大鼠肾组织损伤和肾功能得到改善(13.36±0.57 vs 10.37±0.25 vs 9.28±0.77;72.01±2.39 vs 61.13±9.19 vs 56.28±6.29;2.58±0.27 vs 1.97±0.15 vs 1.88±0.27;0.96±0.17 vs 0.78±0.09 vs 0.71±0.11;P<0.05),肾小球细胞凋亡率和血清炎症因子水平降低(588.36±11.67 vs 502.17±9.25 vs 476.88±8.77;239.21±12.79 vs 182.33±7.29 vs 167.38±7.21;151.88±13.27 vs 112.17±6.15 vs 106.18±9.37;P<0.05),PI3K表达和AKT磷酸化水平降低。[结论]黄芪多糖能够降低糖尿病肾病大鼠血清炎症因子的含量(588.36±11.67 vs 502.17±9.25;239.21±12.79 vs 182.33±7.29;151.88±13.27 vs 112.17±6.15;P<0.05)、减少肾小球细胞凋亡(52.17%±9.25%vs 38.25%±2.19%;P<0.05)并恢复大鼠肾功能，改善STZ导致的肾组织损伤，并且这一作用与抑制PI3K/AKT信号通路相关(0.99±0.07 vs 0.51±0.03;0.79±0.08 vs 0.49±0.08;P<0.05)。

  2024年05期 v.34;No.204 613-618+542页 [查看摘要][在线阅读][下载 1871K]
  

• 石斛多糖对吞咽障碍大鼠舌下神经核内神经元活性的影响

  蒋丽丽;王晓梅;

  [目的]探究石斛多糖对吞咽障碍大鼠舌下神经核内神经元活性的影响。[方法]将大鼠随机分为3组：对照组、模型组和治疗组，每组各10只大鼠。治疗组的大鼠使用石斛多糖(0.33 g/kg)处理1 w,每日1次。对照组和模型组的大鼠使用磷酸盐缓冲液处理。通过尼氏染色分析神经元数量；MTT试验检测神经细胞生长能力；通过流式细胞术分析神经细胞凋亡率；通过蛋白免疫印迹分析Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。[结果]与模型组比较，治疗组舌下神经核尼氏小体的数量显著增加(51.96±6.05 vs 23.31±2.12,P<0.05);舌下神经核内神经细胞增殖能力显著增加(0.31±0.02 vs 0.46±0.02,P<0.05);舌下神经核内神经细胞凋亡率显著降低(17.23%±1.29%vs 35.28%±1.32%,P<0.05);舌下神经核内神经细胞Bax/Bcl-2蛋白表达比值显著降低(0.46±0.06 vs 0.92±0.02; 0.43±0.05 vs 0.22±0.02,P<0.05)。[结论]石斛多糖能够提高吞咽障碍大鼠舌下神经核内神经元活性，对于吞咽障碍可能具有一定疗效。

  2024年05期 v.34;No.204 619-623页 [查看摘要][在线阅读][下载 1598K]
  

• SHP-1调控NF-κB影响深静脉血栓血清炎症因子水平

  胡同山;胡玉菲;赵瑜潇;

  [目的]探究SHP-1与NF-κB对深静脉血栓血清炎症因子水平的影响。[方法]通过免疫组化和蛋白免疫印迹实验分析下肢静脉血管组织中的SHP-1表达水平；将深静脉血栓患者的外周血单个核细胞分为3组：对照组，pcDNA NC组和pcDNA SHP-1组。通过酶联免疫吸附试验分析外周血单个核细胞分泌的IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNF-α的浓度；通过蛋白免疫印迹方法检测不同实验组的外周血单个核细胞中SHP-1以及NF-κB p65的蛋白水平。[结果]免疫组化实验结果显示，SHP-1在深静脉血栓患者的血管组织中表达降低(P<0.05),NF-κB p65在深静脉血栓患者的血管组织中血管组织中表达增加(0.21±0.01 vs 0.82±0.05,P<0.05);酶联免疫吸附试验结果显示，pcDNA SHP-1组的炎症因子IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNF-α的释放水平下降(P<0.05);蛋白免疫印迹实验结果显示，pcDNA SHP-1组的SHP-1蛋白表达水平增加(0.19±0.02 vs 0.22±0.03 vs 0.82±0.06,P<0.05),而NF-κB p65蛋白表达水平降低(0.71±0.03 vs 0.73±0.05 vs 0.25±0.02,P<0.05)。[结论]在深静脉血栓患者体内，SHP-1表达下降能够导致NF-κB p65蛋白表达增加，进而促进外周血单个核细胞释放IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNF-α等炎症因子，加重炎症反应程度，SHP-1是深静脉血栓治疗的潜在靶点。

  2024年05期 v.34;No.204 624-628页 [查看摘要][在线阅读][下载 1425K]
  

• MnTBAP对精子超快速冷冻后动力、凋亡及DNA碎片的影响

  程强军;何生燕;胡小霞;李胜超;王芳;

  [目的]探究锰卟啉(MnTBAP)对精子超快速冷冻后动力学参数、细胞凋亡及DNA碎片的影响。[方法]选择35名体检健康男性精液进行超快速冷冻，以甘油-蛋黄-枸橼酸(GYC)作为基础冷冻剂，随机分为Control组(冷冻前)、M0组(GYC)、M10组(GYC+10μmol/L MnTBAP)、M20组(GYC+20μmol/L MnTBAP)、M40组(GYC+40μmol/L MnTBAP),在液氮中保存72 h后复苏，CASA系统检测精子动力学参数[曲线速度(VCL),平均路径速度(VAP),侧摆幅度(ALH)],流式细胞术检测细胞凋亡率和DNA碎片指数(DFI),并进行对比分析。[结果]与Control组比较，M0组精子总活力、顶体完整性、VCL、VAP、ALH降低，畸形率、细胞凋亡率、DFI升高；与M0组比较，M10组、M20组、M40组精子总活力、顶体完整性、VCL(50.16±8.12 vs 35.67±7.16/38.13±8.05/44.92±7.63)μm/s、VAP(29.51±6.11 vs 19.63±4.36/19.87±5.2/22.57±5.84)μm/s、ALH(3.24±2.16 vs 2.51±1.26/2.96±1.59/3.25±1.35)μm/s升高，畸形率、细胞凋亡率(16.95±6.37 vs 12.62±4.05/9.38±3.12/6.03±2.39)%、DFI(22.15±4.12 vs 18.01±3.05/17.21±3.24/13.56±2.14)%降低，且M40组上述指标改善效果最好(P<0.05)。[结论]MnTBAP能提高精子超快速冷冻后运动能力，降低细胞凋亡率和DNA碎片性，且添加40μmol/L剂量效果最好，可作为保护剂应用于精液冻存中。

  2024年05期 v.34;No.204 629-634页 [查看摘要][在线阅读][下载 1223K]
  

• 孤独症、智力障碍患儿血液中的氧化应激水平分析

  白璐;贾含香;李颖;王娟;周泓;谢芳;王军;

  [目的]为了寻找能够区分孤独症谱系障碍(ASD)、智力障碍(ID)两种疾病的潜在生物标志物。[方法]对招募的ASD、ID儿童进行血浆和血清样本采集，使用一氧化氮分析仪、高效液相色谱和紫外分光光度计检测亚硝酸盐、硝酸盐、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)4种氧化应激相关指标，并比较两组各指标差异。[结果]在血浆中，ASD儿童亚硝酸盐显著高于ID儿童亚硝酸盐，硝酸盐、MDA和T-AOC在两组间无显著差异。血清中亚硝酸盐、硝酸盐、MDA和T-AOC在ASD和ID儿童中均无显著性差异。硝酸盐和T-AOC在血浆和血清中呈显著正相关，亚硝酸盐和MDA在血清和血浆中无相关性。[结论]ASD、ID儿童中氧化应激水平存在差异，血浆亚硝酸盐水平可以作为区分两种疾病的潜在生物标志物。

  2024年05期 v.34;No.204 636-640+635页 [查看摘要][在线阅读][下载 1522K]
  

专题综述

• 细菌多重耐药基因lsa(E)的研究进展

  李琼;刘伟成;张博;陈峥;金钢铸;胡紫微;许春燕;

  目前，携带lsa(E)基因的菌株可对林可酰胺类、截短侧耳素类、链阳菌素A类三大类常用抗菌药物耐药，使细菌产生多重耐药抗性。该文阐述了多重耐药基因lsa(E)的发现、作用机制、遗传环境以及其在不同环境中的流行状况，旨为畜牧业合理使用抗生素、新药物的开发和遏制lsa(E)耐药基因传播提供参考。

  2024年05期 v.34;No.204 641-646页 [查看摘要][在线阅读][下载 995K]
  

• m⁶A修饰介导的氧化应激与DNA损伤在衰老中的研究进展

  方镜;张雷;

  N6-甲基腺嘌呤(m~6A)是一种动态且可逆的表观转录组学调控，在各种生物过程中发挥着关键作用。近年来，m~6A修饰在衰老及衰老相关过程中参与调控机制引起了越来越多的关注，这为了解衰老分子机制并发展新的治疗策略成为一种可能。该文重点介绍m~6A修饰介导调控氧化应激与DNA损伤诱导衰老的潜在机制，并总结了m~6A在衰老及相关过程中潜在的治疗方向。最后讨论了衰老过程中m~6A表观转录组学调控认识的局限性以及技术困难，强调了未来研究的潜在方向。

  2024年05期 v.34;No.204 647-651+670页 [查看摘要][在线阅读][下载 967K]
  

• SynNotch系统在肿瘤治疗中的应用

  盛祥利;方镜;贾永康;张雷;

  SynNotch系统是在Notch信号通路基础上通过合成生物学方法设计出的一种工程化的受体系统。因其高度的灵活性和特异性，SynNotch系统在细胞治疗，组织工程，疾病模型等方面均有应用。肿瘤疾病的传统治疗方法中有相当大的局限性和副作用，而本文以SynNotch的结构和作用机制为出发点，总结了SynNotch在肿瘤治疗中的不同应用和机制，陈述SynNotch系统在癌症治疗领域的潜力，为后续的肿瘤治疗提供新的治疗策略。

  2024年05期 v.34;No.204 652-656+646页 [查看摘要][在线阅读][下载 965K]
  

• B型血友病分子治疗策略的研究进展

  陈龙;杨金龙;马金;沈滟;高蒙;沈国民;

  B型血友病是维生素K依赖蛋白凝血因子Ⅸ(FIX)缺乏导致的一种伴X染色体隐性出血性疾病，其主要由基因突变导致。近年来，随着B型血友病致病突变的机制被逐渐阐明，针对不同致病机制的分子治疗策略也逐渐被关注。该文首先对FIX的分子结构、生物学功能及其在B型血友病的突变类型及数目进行阐述，然后对基于不同基因表达层面设计的针对不同致病机制的分子治疗策略进行综述，这将为B型血友病临床治疗药物的研发提供了新思路，同时，也对B型血友病患者的精准治疗具有重要意义。

  2024年05期 v.34;No.204 657-664页 [查看摘要][在线阅读][下载 990K]
  

• 一氧化氮在孤独症中作用及调控机制进展

  白璐;张月美;向往;肖亚倩;黄胜;朱红敏;王军;

  一氧化氮(NO)是一种重要的生物信号分子，在人体生理病理中发挥重要作用。孤独症(ASD)是一种复杂的神经发育障碍疾病，目前病因不明。在ASD患者中发现NO水平异常，但NO在ASD病因中发挥怎样的作用尚不清楚。该文综述了NO生理功能，通过ASD的多种致病风险因素探究NO如何参与调控ASD发病机制，从NO对ASD发病机制的调控角度为ASD诊断和治疗提供理论依据。

  2024年05期 v.34;No.204 665-670页 [查看摘要][在线阅读][下载 953K]
  
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