论著

• 新月弯孢霉转录组分析及甾体C₁₁β-羟化酶基因鉴定

  明卓;宋士奎;苏正定;

  [目的]分析新月弯孢霉转录组，对甾体C_(11)β-羟基化酶基因进行鉴定。[方法]结合生物信息学和蛋白结构学对转录组分析，利用AlphaFold2进行蛋白结构模拟，与已知人源醛固酮合酶hCYP11B 2进行结构比对。[结果]在转录组中，共获得24 943条Unigenes,平均长度1 915 bp。18 792条(75.34%)可以匹配到蛋白数据库获得注释信息。Unigenes在各数据库中注释的基因数分别为：在COG数据库中有5 615条(22.51%),在GO数据库中有4 424条(17.74%),在KEGG数据库中有6 322条(25.35%),在Swiss-Prot数据库中有11 348条(45.50%)。通过初筛获得39个基因。经过AlphaFold2的结构模拟，与人的甾体醛固酮合酶(hCYP11B2)结构比对进行复筛，共26条甾体C_(11)β-羟基化酶相关基因被鉴定出来。[结论]该新月弯孢霉菌株具有甾体C_(11)β-羟基化的能力，通过对其转录组进行分析，共鉴定出26条甾体C_(11)β-羟基化酶相关基因。

  2023年05期 v.33;No.198 537-543页 [查看摘要][在线阅读][下载 1308K]
  

• 人55型腺病毒Fiber Knob蛋白原核表达、纯化及活性检测

  陈楠;吴同鑫;章汝;李晓月;顾欣雨;唐香平;李云;易永祥;

  [目的]构建Fiber Knob原核表达载体，在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导其表达，纯化具有良好生物活性的Fiber Knob重组蛋白。[方法]从人55型腺病毒(HAdV-55)中通过PCR扩增目的基因片段Fiber Knob,将该片段与原核表达载体pET15b-His连接，构建重组原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,转化大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG诱导表达目的蛋白，通过镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化，SDS-PAGE和Western Blotting检测目的蛋白的表达与纯度。ELISA检测目的蛋白的生物学活性。[结果]重组表达质粒经双酶切和测序鉴定证明构建正确。重组蛋白主要以包涵体形式存在，上清中也有少量表达，重组蛋白相对分子质量约为25 kDa且纯度95%以上，ELISA结果显示制备的Fiber Knob蛋白与CD46胞外域蛋白之间存在直接的相互作用，并且这种相互作用是剂量依赖性的。[结论]成功构建了原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,在大肠杆菌中成功诱导表达了Fiber Knob蛋白，纯化的Fiber Knob蛋白具有明显结合CD46胞外域蛋白的生物学活性，为其单克隆抗体的制备及人55型腺病毒新的细胞受体的发现奠定了基础。

  2023年05期 v.33;No.198 544-550页 [查看摘要][在线阅读][下载 411K]
  

• 阻断剂单克隆抗体制备及表达工艺优化

  崔亚敏;李昕益;田晓平;孙静静;宋子博;周雷鸣;赵巧辉;李桂林;

  [目的]体外制备阻断剂单克隆抗体，并对表达工艺进行优化。[方法]通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞抗体基因序列，经分子克隆构建至真核表达载体pCHO1.0,在CHO-S细胞中构建稳定表达细胞株；运用DOE实验设计方法，筛选最佳培养基、培养温度及补料方式；在5 L生物反应器进行工艺验证，蛋白A亲和纯化后用化学发光法进行阻断性能验证。[结果]目的基因序列钓取成功，稳定表达单克隆细胞株11H7表达量为2.90 g/L;使用CHO Max A培养基、梯度补料策略、32℃培养可将表达量提升至5.28 g/L,5 L生物反应器表达量为5.47 g/L,纯度均>95%,且在磁微粒G17和ProGRP项目异常样本中检测满足阻断性能需求。[结论]阻断剂单克隆抗体构建成功，通过表达工艺优化，表达量由2.90 g/L提升至5.28 g/L,且在生物反应器中得到初步验证。

  2023年05期 v.33;No.198 551-557页 [查看摘要][在线阅读][下载 629K]
  

• 脑钠肽的重组表达、纯化及其在临床检验质控中的应用

  李贺鑫;汤小琨;孙高远;黄薇;王璐瑶;张俊华;王萌;邹丽辉;

  [目的]制备脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)重组蛋白，为临床实验室检测BNP提供稳定可靠、方便快捷的质控品或参考品原料。[方法]优化BNP编码密码子，与麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein, MBP)编码基因及FXa识别序列一并克隆至表达载体pRSFDuet-1,在大肠杆菌工程菌BL21(DE3)中诱导表达，可溶性表达产物MBP-BNP经纯化、丝氨酸蛋白酶FXa切除MBP后，获得具有生物活性的BNP蛋白。[结果]将NPPB(natriuretic peptide precursor B,NPPB)基因参考序列内26%的罕见密码子全部替换成了大肠杆菌常用密码子，成功构建了重组表达质粒MBP-BNP-pRSFDuet-1,酶切、测序鉴定正确后转入BL21(DE3)获得可溶性高表达MBP-BNP融合蛋白的工程菌株。用镍柱和交联葡聚糖G50分子筛纯化后获得250 mg/L的MBP-BNP融合蛋白，经FXa切除MBP后得到1.65 mg/L的BNP蛋白，比临床实验室常规BNP检测区间上限高出约50倍。[结论]与传统的参考品制备方法相比，运用基因工程技术可在大肠杆菌中稳定可溶性表达浓度较高的BNP蛋白，可为临床实验室提供更方便快捷、质优价廉的质控品或标准品原材料，提供了理论基础和技术保障。

  2023年05期 v.33;No.198 558-562页 [查看摘要][在线阅读][下载 498K]
  

技术与方法

• 北京欧文氏菌黏附及侵袭毒力因子分析

  常晓宁;宋爽;高琪;赵爽;郭金英;荣成博;

  [目的]对侧耳细菌性软腐病病原菌北京欧文氏菌(Erwinia beijingensis)侵入刺芹侧耳的方式及相关黏附因子、侵袭因子进行分析，为刺芹侧耳细菌性软腐病防治提供依据。[方法]观察病原菌侵染刺芹侧耳的超微结构，利用在线软件对毒力因子进行分析比对。[结果]透射电镜观察表明北京欧文氏菌侵染宿主具有黏附和侵入两种状态。通过同源比对发现该病原菌基因组上存在17个编码黏附素的基因和1个编码侵袭素的基因，对黏附素蛋白结构域分析表明大多数为菌毛蛋白，菌毛和病原菌运动密切相关，在病原菌侵入宿主过程中发挥重要作用。[结论]阐明了北京欧文氏菌通过黏附、侵入两种方式侵染刺芹侧耳，明确了黏附素、侵袭素在侵染宿主中的作用，揭示了其致病过程，为该病害防治提供了理论基础。

  2023年05期 v.33;No.198 563-568页 [查看摘要][在线阅读][下载 681K]
  

• 铁死亡抑制剂Fer-1修复高糖环境血管内皮细胞机制

  王统彩;娜仁其木格;马玉珍;

  [目的]探究铁死亡抑制剂Fer-1对高糖环境下血管内皮细胞的修复作用及分子调控机制。[方法]将培养的人脐静脉血管内皮细胞接种于6孔培养板中，分为对照组、高糖组、高糖+铁死亡抑制剂组、DMSO组和甘露醇组。培养48 h后收集细胞；电子显微镜观察各组细胞线粒体形态；与铁显色剂混合后，按照酶联免疫法检测各组总铁浓度、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽(GSH)含量；采用DCFH-DA荧光染色测定各组总ROS含量；利用Western Blotting检测各组细胞铁死亡标记物谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)和转铁蛋白受体-1(TFR-1)的表达。[结果]与对照组相比，高糖组的铁含量、MDA、ROS明显增多，GSH明显减少，GPX4蛋白表达明显下调，TFR-1蛋白表达量增多，P<0.05;与高糖组相比，Fer-1组的铁含量、MDA、ROS明显下降，GSH增多，GPX4的蛋白表达量明显增多，TFR-1的蛋白表达量下降，P<0.05。[结论]高糖能够引起血管内皮细胞损伤，Fer-1可通过抑制脂质过氧化对高糖状态下血管内皮细胞的损伤发挥有效的修复作用(P<0.05)。

  2023年05期 v.33;No.198 569-573+568页 [查看摘要][在线阅读][下载 418K]
  

• 生信分析二氢丹参酮Ⅰ抗基底样型乳腺癌机制

  孙璐;叶静;

  [目的]探究二氢丹参酮Ⅰ抗基底样型乳腺癌(Basal-like breast cancer, BLBC)的机制。[方法]通过pharmmapper数据库反向垂钓二氢丹参酮I相关靶点；以“basal-like”为关键词，于TCGA数据库中下载临床BLBC的组学数据。使用Bioinformatics&Evolutionary Genomics数据库获取二者交集，并导入DAVID(v2021)数据库中进行KEGG注释和GO富集；另使用STRING(v11.5)数据库进行蛋白互作分析，并于Cytoscape(v3.8.1)软件中筛选核心基因。利用临床生信之家、Kaplan-Meier Plotter、UALCAN数据库验证核心基因的表达，获取预后生物标志物并分析其在不同表型乳腺癌及其它23种肿瘤中的表达水平。[结果]共获取二氢丹参酮Ⅰ相关靶点914个、BLBC相关靶点6 394个。117个交集靶点共参与15条通路、109个GO条目。二氢丹参酮Ⅰ主要通过调节癌症的途径、细胞衰老、代谢途径等抗BLBC。Cytohubba所获10个核心基因中仅CCDK1的表达未通过大样本数据验证，且低表达的ZEB1与BLBC预后不良正相关，并在多种乳腺癌亚型中均显著低表达。[结论]二氢丹参酮Ⅰ通过调控包括ZEB1在内的多个靶点及通路治疗BLBC,其中低表达的ZEB1会造成BLBC患者生存和预后不良。

  2023年05期 v.33;No.198 574-580+543页 [查看摘要][在线阅读][下载 2595K]
  

开发与应用

• miR-106a靶向调控TLR4对A549细胞增殖的作用机制

  高少林;王晓丹;朱海勇;马政;芦旭超;

  [目的]验证miR-106a对Toll受体4(TLR4)的靶向性，探讨其对肺癌细胞系A549增殖的调控作用。[方法]采用TCGA数据库和双荧光素酶实验分析miR-106a与TLR4相关性，将A549细胞分为NC组、inhibitor组、inhibitor+TLR4组和TLR4组，RT-PCR检测细胞miR-106a、TLR4 mRNA表达，CCK8检测细胞增殖水平，流式细胞仪检测细胞凋亡，Western Blot检测TLR4、细胞周期蛋白(Cyclin)、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡蛋白(Bax)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)蛋白表达表达。[结果]双荧光素酶实验显示过表达miR-106a能提高TLR4蛋白表达(1.00±0.12 vs 1.39±0.16,P<0.05);与NC组比较，inhibitor组miR-106a、TLR4 mRNA及蛋白表达、细胞增殖、Bcl-2、PCNA、Cyclin蛋白表达均降低，凋亡率、Bax表达升高(P<0.05),TLR4组miR-106a、TLR4 mRNA及蛋白表达、细胞增殖、Bcl-2、PCNA、Cyclin蛋白表达升高，凋亡率、Bax表达降低(P<0.05);与inhibitor组比较，inhibitor+TLR4组miR-106a、TLR4 mRNA及蛋白表达、细胞增殖、Bcl-2、PCNA、Cyclin蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、Bax表达降低(P<0.05)。[结论]miR-106a可通过靶向促进TLR4表达来促进肺癌A549细胞增殖，抑制其凋亡，从而发挥促癌作用。

  2023年05期 v.33;No.198 581-585+557页 [查看摘要][在线阅读][下载 456K]
  

• miR-106b-5p 3′-末端2′-O-甲基化对乳腺癌细胞的影响

  李双健;李丹;丰锦春;李宇翔;迪力夏提·金斯汗;赵倩;

  [目的]探讨miR-106b-5p的3′-末端2′-O-甲基化修饰在乳腺癌细胞中的影响。[方法]纳入2019年9月-2021年9月收治的乳腺癌患者，收集其乳腺癌组织和癌旁组织。敲低或过表达miR-106b-5p后，检测乳腺癌细胞的增值水平。乳腺癌和癌旁组织中纯化的miR-106b-5p进行质谱分析以确定分子质量和LC-MS/MS确定核苷修饰。分析甲基转移酶HENMT1对miR-106b-5p的3′-末端2′-O-甲基化作用。[结果]敲低miR-106b-5p后，乳腺癌细胞的增值水平下降(P<0.05)。乳腺组织中miR-106b-5p的3′-末端2′-O-甲基化显著高于癌旁中的水平(P<0.05)。敲低HENMT1后，乳腺癌细胞MCF7中miR-106b-5p的3′-末端2′-O-甲基化水平下降(P<0.05)。敲低HENMT1后，miR-106b-5p的半衰期下降(P<0.05)。[结论]HENMT1能对miR-106b-5p进行3′-末端2′-O-甲基化修饰(65.32±16.40 vs 11.49±3.20)。3′-末端2′-O-甲基化能提升miR-106b-5p的半衰期(0.79±0.05 vs 0.98±0.07)并促进miR-106b-5p的促乳腺癌细胞增殖(1.70±0.08 vs 1.04±0.06)。

  2023年05期 v.33;No.198 586-591+550页 [查看摘要][在线阅读][下载 536K]
  

• miR-340-5p对BRCA1缺陷型卵巢癌细胞复制叉稳定性的影响

  廖泽兰;裴凯歌;曹莹;王愚;

  [目的]探讨miR-340-5p对BRCA1缺陷型卵巢癌细胞复制叉稳定性的潜在机制。[方法]使用来自癌症基因组图谱(TCGA)卵巢癌数据集，将BRCA1突变肿瘤中的miR-340-5p表达与BRCA1野生型肿瘤进行比较。过表达或敲低miR-340-5p后，检测BRCA1缺陷型UWB1.289细胞中复制叉的稳定性、细胞增殖水平。UWB1.289细胞中敲低或过表达miR-340-5p后进行转录组测序并使用siRNA筛选鉴定miR-340-5p的靶向基因。[结果]miR-340-5p低表达与乳腺肿瘤中BRCA1缺乏相关(0.04±0.01 vs 0.15±0.04,P<0.05)。具有低表达miR-340-5p的BRCA1缺陷型肿瘤具有更高水平的基因组改变(0.37±0.05 vs 0.66±0.11,P<0.05)。过表达miR-340-5p后，BRCA1缺陷型UWB1.289细胞中复制叉不稳定性增强(1.12±0.23 vs 0.81±0.10,P<0.05)。相反，在UWB1.289细胞中同时过表达BRCA1和miR-340-5p并没有增强复制叉的不稳定性。此外，过表达或者敲低miR-340-5p后UWB1.289细胞的增殖水平分别下降或者上升(P<0.05),而在过表达BRCA1的UWB1.289细胞中无此现象。荧光素酶报告实验发现miR-340-5p靶向USP1 mRNA的3′端非翻译区(P<0.05)。过表达或者敲低miR-340-5p后，USP1的mRNA和蛋白水平分别下降或者上升(P<0.05)。敲低USP1或者过表达USP1时，UWB1.289细胞中复制叉不稳定性增强(P<0.05)。同时，敲低USP1后，UWB1.289细胞的增殖水平下降(P<0.05);过表达USP1后UWB1.289细胞的增殖水平上升(P<0.05),而在过表达BRCA1的UWB1.289细胞中无此现象。[结论] miR-340-5p能够促进BRCA1缺陷卵巢癌细胞复制叉的不稳定性，并抑制BRCA1缺陷细胞的存活。

  2023年05期 v.33;No.198 592-598页 [查看摘要][在线阅读][下载 750K]
  

• miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞增殖、凋亡影响

  刘海英;陈峰;姚嘉;

  [目的]探究miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。[方法]利用脂质体转染试剂将miR-767-5p抑制剂和inhibitor-NC转入乳腺癌细胞MCF-7中，荧光染色法检测转染效率。将细胞分为3组、Control组、miR-767-5p inhibitor组和inhibitor-NC组，CCK8检测各组细胞的增殖情况，流式检测细胞凋亡情况，Western Blotting检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和Caspase-3)的表达。[结果]miR-767-5p抑制剂和inhibitor-NC成功转入乳腺癌细胞MCF-7中，与对照组相比，miR-767-5p抑制剂组细胞的增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。[结论]抑制miR-767-5p的表达能下调Bcl-2蛋白的表达，上调Bax和Caspase-3蛋白的表达，进而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、促进细胞凋亡。

  2023年05期 v.33;No.198 599-603+631页 [查看摘要][在线阅读][下载 530K]
  

• KIAA1456靶向调控Notch通路抑制非小细胞肺癌

  郭利苓;焦彦华;吴琳乾;

  [目的]探讨KIAA1456通过靶向Notch调控对非小细胞肺癌生长、侵袭的影响。[方法]设置H1299细胞组、KIAA1456 mimics组、KIAA1456 inhibitor组，各组细胞培养48 h;培养结束后，CCK-8测量细胞增殖，流式细胞仪测定细胞凋亡水平，Transwell实验测定细胞侵袭水平，RT-PCR法及蛋白印迹法测定细胞KIAA1456、Notch1 mRNA与蛋白水平。[结果]KIAA1456 mimics组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数低于H1299细胞组，KIAA1456 inhibitor组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数高于H1299细胞组、KIAA1456 mimics组。KIAA1456 mimics组凋亡率、KIAA1456 mRNA和蛋白高于H1299细胞组(P<0.05),KIAA1456 inhibitor组凋亡率、KIAA1456 mRNA和蛋白低于H1299细胞组、KIAA1456 mimics组(P<0.05)。KIAA1456 mimics组高于H1299细胞组(P<0.05),KIAA1456 mimics组Notch1 mRNA和蛋白低于H1299细胞组(P<0.05),KIAA1456 inhibitor组Notch1 mRNA和蛋白高于H1299细胞组、KIAA1456 mimics组(P<0.05)。[结论]KIAA1456能抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖侵袭，促进其凋亡；其机制可能与KIAA1456抑制Notch通路的激活有关。

  2023年05期 v.33;No.198 604-609页 [查看摘要][在线阅读][下载 452K]
  

• 双歧杆菌抗结直肠癌细胞活性的机制

  杨兴杰;刘莉;高立香;陈颖;郭文君;孙乃英;

  [目的]探讨双歧杆菌(Bifidobacterium)抗结直肠癌细胞活性的潜在机制。[方法]两歧双歧杆菌(B.bifidum)、短双歧杆菌(B.breve)、长双歧杆菌(B.longum)培养上清处理后，检测结直肠癌细胞HCT116和HT29的增殖水平。亲水代谢质谱和代谢物筛选鉴定双气杆菌分泌的关键代谢分子。[结果]双歧杆菌培养上清处理后，结直肠癌细胞的增殖水平均显著下降(1.12±0.09 vs 0.48±0.13,P<0.05)。10μmol/L顺芷酸能够显著抑制结直肠癌细胞的增殖水平(1.24±0.09 vs 0.56±0.11,P<0.05),并且存在剂量依赖效应。顺芷酸处理后，结直肠癌细胞中Wnt/β-catenin通路标志基因Axin2(1.08±0.21 vs 0.03±0.01,P<0.05)和Lgr5的表达水平下降(2.35±0.24 vs 0.06±0.01,P<0.05),并且存在剂量依赖效应。顺芷酸处理后，结直肠癌细胞中β-catenin的活性显著下降(23466.52±275.10 vs 535.88±108.82,P<0.05),并且存在剂量依赖效应。[结论]双歧杆菌分泌的顺芷酸通过抑制Wnt/β-catenin通路能够显著抑制结直肠癌细胞的增殖水平(1.12±0.09 vs 0.48±0.13)。

  2023年05期 v.33;No.198 610-615+645页 [查看摘要][在线阅读][下载 858K]
  

• 薯蓣皂苷对肺癌细胞生物学过程的影响机制

  符蓉;曹斌;王天舒;

  [目的]研究薯蓣皂苷对肺癌细胞的生物学过程的影响及其相关机制。[方法]MTT试验及流式细胞术检测不同浓度薯蓣皂苷对A549细胞增殖及凋亡的影响，并筛选半数抑制浓度(IC50)。酶活性试剂盒技术检测细胞己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性，WB检测Hippo-YAP通路蛋白表达水平。[结果] MTT的结果发现，薯蓣皂苷在24 h对A549细胞的IC50是0.08μmol/L。随着薯蓣皂苷浓度的增大，A549细胞凋亡率越高。与对照组相比，薯蓣皂苷或Veteporfin处理组的A549细胞葡萄糖摄取能力降低，乳酸及ATP产量降低(P均<0.05)。与对照组相比，薯蓣皂苷或Veteporfin处理可降低HK及PK活性(P均<0.05),并降低A549细胞内MOB1及p-YAP蛋白表达量(P均<0.05)。[结论]薯蓣皂苷可能是通过干预Hippo-YAP信号通路抑制糖酵解作用进而促进细胞凋亡。

  2023年05期 v.33;No.198 616-620页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K]
  

• TROAP过表达在肝癌中的预后及临床意义

  单海燕;杨露;朱钰;褚吉祥;柯腾飞;廖承德;

  [目的]评估TROAP在肝癌和正常组中的表达情况及其在肝癌患者预后中的临床意义。[方法]从TCGA数据库中下载到所有肝癌相关的临床数据，利用R软件进行统计分析，评估TROAP在肝癌中的表达水平及临床意义。采用Kaplan-Meier法、Cox回归分析和列线图评价TROAP对患者预后的价值。通过COX回归分析TROAP过表达与肝细胞癌患者临床特征之间的相关性，验证TROAP能否成为独立的预后因素。利用Diana-microT和miRwalk数据库来预测TROAP的调控miRNAs。最后，采用基因集合富集分析筛选出肝癌中TROAP过表达相关的生物学通路。[结果]在肿瘤组织中，TROAP表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05)且与患者不良预后相关(P<0.01)。TROAP的过表达也缩短了肝癌患者的整体生存时间(P<0.05)且与病理分级和临床肿瘤分期显著相关(P<0.05)。Cox回归分析表明，TROAP的过表达是肝癌患者总生存期的独立预后因素。miR-139-3p在肝癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织，与TROAP的表达相反，可能参与调控TROAP蛋白的表达。基因富集分析结果表明“细胞循环”、“DNA复制”、“P53信号通路”等在TROAP高表达组中富集，提示高表达的TROAP可能与肝癌的增殖、侵袭和转移有关。[结论]TROAP在肝癌中过表达且与肝癌关键临床特征显著相关，是肝癌预后不良的独立预测因子。信号富集通路表明TROAP通过调控细胞周期、DNA复制等通路参与了HCC的发生和进展。

  2023年05期 v.33;No.198 621-631页 [查看摘要][在线阅读][下载 1725K]
  

• 贝莱斯芽孢杆菌D103产纤维素酶优化及途径分析

  黄悦姝;邓超;张馨月;高旺;曾楠;李炳学;

  [目的]获得高纤维素酶活芽孢杆菌菌株，优化产酶条件并分析其产酶途径。[方法]应用刚果红染色法和羧甲基纤维素酶活法筛选纤维素降解菌株，利用PB试验及最陡爬坡试验优化降解菌的高纤维素酶活培养条件。对降解菌的全基因组数据进行生物信息学分析，探究其产纤维素酶途径。[结果]贝莱斯芽孢杆菌D103刚果红染色直径D/d值高达2.49,纤维素酶活性为41.73 U/mL。对D103培养条件优化后，BBD试验中最佳结果为酶活达到65.94 U/mL,提高53%。PB试验结果表明，培养时间对纤维素酶活影响最显著，响应面法分析，装液量与蛋白胨添加量交互影响最大。D103全基因组全长3 857 531 bp, GC含量46.7%,共编码基因3 884个。D103全基因组中找到包括纤维素代谢及半纤维素代谢基因共16个。[结论]贝莱斯芽孢杆菌D103高产纤维素酶，其代谢通路中存在纤维素分析途径。

  2023年05期 v.33;No.198 632-640页 [查看摘要][在线阅读][下载 1041K]
  

• 芦丁水解过滤液制备L-鼠李糖工艺优化

  杨阳;刘凯华;毛华;张良明;杨景霞;

  [目的]优选芦丁水解过滤液制备L-鼠李糖工艺。[方法]通过正交试验设计，以单位时间内葡萄糖发酵量为考察指标，筛选出发酵pH、酵母添加量、温度对发酵工艺的影响；以吸光度为指标，筛选出温度、活性炭用量、时间对脱色工艺的影响。[结果]最佳发酵脱色工艺为：芦丁水解过滤液用氢氧化钡调pH值至5～7,过滤，滤液添加酵母1‰(m/v),30℃发酵14 h时，加3‰(m/v)活性炭，50℃搅拌90 min。[结论]对芦丁水解过滤液进行了有效利用，减少废水排放，优选的最佳发酵脱色工艺稳定可行，成本低，所得鼠李糖纯度≥98%。

  2023年05期 v.33;No.198 641-645页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K]
  

• 大麻二酚抑菌效果及体外抗氧化活性分析

  张一宁;杨瑾;徐欣宇;张玉红;

  [目的]比较大麻二酚(CBD)对6株标准菌的抑菌效果和4种方法评价体外抗氧化活性。[方法]采用滤纸片法和二倍稀释法，以左氧氟沙星为阳性对照，CBD对金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌体外抑菌实验，测量抑菌圈的直径，测定MIC和MBC,评价其抑菌效果。通过FRAP总抗氧化能力、Fe~(3+)还原能力、DPPH自由基和ABTS自由基清除4种方法，与VC、BHA、BHT比较，评价其抗氧化能力。[结果]CBD对不同标准菌株均有明显抑菌效果；滤纸片法显示其对选定的6株菌株皆有抑菌效果，二倍稀释法结果表明其浓度为5μmol/mL时，白色念珠菌抑菌高敏感，抑菌圈为10.1 mm。CBD抗氧化能力强于BHA,低于VC,与BHT相近。[结论] CBD对6种菌均有抑菌效果，对白色念珠菌抑菌效果最佳，枯草芽孢杆菌次之，最小抑菌浓度为6.5μg/mL,对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差，为25μg/mL。4种不同抗氧化能力实验表明CBD具有显著的抗氧化活性，对Fe~(3+)还原能力强，DPPH自由基的清除率接近80%,ABTS自由基清除率达50%以上。

  2023年05期 v.33;No.198 646-650页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K]
  

专题综述

• 表观遗传修饰对ERVs活性调控的研究进展

  郑晓凤;黄小龙;王诗博;陈明月;

  内源性逆转录病毒(ERVs)是在几百万年前通过侵入生殖细胞整合到宿主基因组，并以孟德尔方式遗传至今的逆转录病毒的残余物。ERVs通常被认为是垃圾DNA序列，但近年来，越来越多研究表明部分ERVs仍发挥重要的生理功能，如参与肿瘤、自身免疫疾病和神经相关疾病的发生发展。该文通过DNA甲基化、组蛋白修饰、m~6A以及非编码RNA等方面探讨ERVs活性调控以及疾病的发生与发展，并提出ERVs的激活或沉默状态主要受到表观遗传修饰的控制，ERVs的表观遗传调控机制将直接影响其生物学功能的正常发挥进一步影响疾病的发生与发展。为深入研究ERVs的活性调控以及疾病的预防提供了新思路。

  2023年05期 v.33;No.198 651-657+640页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
  

• 人内源性逆转录病毒K家族与癌症相关性的研究进展

  韩明姝;王诗博;黄小龙;陈明月;

  人类内源性逆转录病毒(Human endogenous retroviruses, HERVs)是由灵长类动物进化过程中的外源性逆转录病毒感染衍生而来，约占人类基因组的8%。由于突变、缺失等原因，大多数HERVs丧失具有编码能力的完整开放阅读框架(Open Reading Frame, ORF),但仍有部分HERVs可以编码完整的病毒蛋白，比如人类基因组中最新整合的人内源性逆转录病毒K家族(HERV-K)。HERV-K在多种恶性肿瘤中的作用已经被证实，然而，HERV-K的激活和表达在多大程度上参与了癌症的发展，还是未知的。该文针对HERV-K在不同癌症治疗中的最新研究进展、作用机制以及其作为癌症诊断、治疗或预后的新型生物标志物作一综述。

  2023年05期 v.33;No.198 658-663+631页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
  

• 微藻异养培养中碳源的研究进展

  冯桃;陈华友;

  碳源是用于细胞合成维持细胞生命活动的营养物质，是微藻异养生长中最关键的影响因素，因此选择合适的碳源对微藻产业发展至关重要。该文综述了在微藻异养培养中碳源的研究进展，依次介绍了微藻异养培养的方式，分析了碳源在微藻异养培养中的研究进展和优缺点，罗列了目前遇到的问题，提出有效的解决措施，最后结合现状展望未来发展方向。

  2023年05期 v.33;No.198 664-670页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
  
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