- 龚杰万,刘飞鹏
目的是将抗菌肽基因misgurin以同向串连方式连接成多拷贝基因 ,并克隆到甲醇酵母表达载体上。在设计和连接中采用新策略 ,运用常规分子克隆操作进行表达载体构建 ,结果表明 ,该策略能方便高效地进行基因多拷贝同向串连表达载体的构建。
2002年01期 1-2页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k] - 袁勇芳,许杨,李思光,汤祖辉
采用改进的氯化苄法对红曲霉DNA进行提取纯化 ,探讨了提取液中EDTA的浓度以及其他因素对提取结果的影响。同时 ,以该法提取的DNA为模板 ,采用正交实验优化RAPD分析最佳反应条件。结果表明 ,当提取液中EDTA浓度为 12 5mmol/l时 ,所得的红曲霉DNA的质量和数量均较理想 ,每克红曲霉菌丝体 (湿重 )能提取到 5 0 μg的DNA ,分子量约为 2 5kb ,以此DNA为模板进行PCR扩增 ,其最佳反应体系为 :Mg2 + 2 0mmol/l,dNTPs 0 15mmol/l,Taq 0 0 5U/ μl,模板DNA 1 2ng/ μl,随机引物 0 36 μmol/l,Tris-HCl10mmol/lpH9 0 ,KCl 5 0mmol/l,NonidetP40 0 1%。另外 ,通过对比RNA酶消化前后的模板扩增结果证明了本实验酶的消化的必要性 ,对比了不同预变性时间处理模板对RAPD -PCR扩增的影响 ,发现不经过预变性的模板扩增结果最理想。
2002年01期 2-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] - 杨帆,张纪兴,吴文言,Stephen M Mahler
采用介体电泳技术对CHO细胞培养液中的人鼠嵌合单克隆抗体c30 6进行纯化 ,第一步在pH8 6条件下进行 ,抗体带正电荷而培养液中的大部分杂质带负电荷 ,抗体和杂质在电场作用下向两电极运动 ,结果被分离在分离膜的两侧 ,SDS -PAGE显示抗体纯度达 95 % ,且剩余杂质的分子量均小于抗体的分子量。第二步是在pH6 0条件下进行 ,此时抗体和杂质都带正电荷 ,它们在电场作用下向同一方向运动 ,但分离膜只允许分子量较小的杂质通过 ,抗体得以进一步纯化 ,抗体的回收率为 80 % ,而且生物活性未受影响。
2002年01期 5-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 105k] - 徐淑红,徐香玲,王艳杰
用花粉管通道法向烟草中导入几丁质酶基因 ,通过PCR检测的 10 6株植株有 4株表现出阳性 ,经点杂交检测得到 3株阳性植株 ,用花粉管通道法向烟草导入几丁质酶基因具有可行性
2002年01期 7-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 52k] - 陈庆森,张晓玲,阎亚丽,刘剑虹,庞广昌
对Erwiniaherbicola(A2 5 )菌株的冰核活性蛋白的分离纯化及电泳进行研究。主要方法①按双温培养的方法 ,获得了较高的生物量积累和强冰核活性的诱导表达。②实验采用渗透压冲击法破碎细菌细胞 ,破碎率达 98 6 7%。③通过差速离心法获取不同冰核活性蛋白组分 ,测定各组分的冰核活性和SDS -PAGE电泳图谱分析。建立了冰核活性因子的高冰核活性与离心力之间的关系 ;利用SDS -PAGE还建立了具冰核活性蛋白的分子量的大小与冰核活性蛋白组分之间的关系。证实了具高冰核活性蛋白质最小结构单位约为 2 6 0kD。
2002年01期 8-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 67k] - 曾胤新,陈波
通过对大量极区低温海洋菌株的分离、筛选及进一步的生理生化特性研究 ,获得 1株最适生长温度为 15℃、生长温度上限为 35℃、产蛋白酶及多种多糖水解酶的耐冷细菌。该菌过氧化氢酶为阳性 ,具有弱嗜盐性 ;蔗糖、可溶性淀粉是有利于菌株生长的碳源物质 ,而酵母膏则是效果最佳的氮源物质。该菌株所产蛋白酶的最适作用温度为 5 5℃ ,而淀粉酶、琼脂酶及纤维素酶的最适作用温度皆为 35℃。
2002年01期 10-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k] - 李英敏,杨海波,刘艳,于媛,张欣华
对小球藻生物吸附水中Pb2 + 的影响因素作了初步研究。实验表明 :在小球藻处于指数生长期和静止期时加入Pb2 + ,去除率达 6 0 %以上 ;当藻细胞密度一定时 ,随着Pb2 + 浓度的增加 ,Pb2 + 的去除率增大 ;当Pb2 + 浓度一定时 ,随着藻细胞密度的增加 ,小球藻对Pb2 + 的去除率增大 ,藻细胞密度为 1 2 9× 10 8个 /ml时 ,去除率可达 92 82 % ;加强光照可以促进小球藻对Pb2 + 的吸附 ;在pH值为 5～ 10的范围内 ,pH对Pb2 + 吸附影响不大 ,较佳的pH值在 7左右。实验最佳条件的去除率在 90 %以上 ,去除效果较好。
2002年01期 12-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 40k] - 徐志祥,赫然,李宝健
系统研究了碳源、氮源、无机盐、维生素等培养基因素对灰树花深层发酵菌丝体产量的影响 ,并通过均匀设计法优化了发酵培养基配方。结果表明 :4 6 %玉米粉、3 5 %豆饼粉、0 1%葡萄糖、0 32 %KH2 PO4 、0 0 1%MgSO4 、少量VB1的培养基配方可使菌丝体产量达到最大。采用此配方试验 ,菌丝体产量平均值达 1 77± 0 0 6g/10 0mL。
2002年01期 13-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 40k] - 黄鹭强,王明兹,李素萍,欧琳,施巧琴,吴松刚
采用波长 6 5 0nm ,功率 40mW ,功率密度 13W/cm2 的半导体激光 ,对紫球藻 (Porphyridiumcruentum)进行诱变 ,辐照时间分别为 5min、10min、2 0min。通过对紫球藻每天细胞数、叶绿素a、第 7d细胞干重和胞外多糖产量的测定可知 :与对照组比较 ,3个处理对紫球藻生长及胞外多糖产生影响 ,5min、10min均有不同程度的促进作用 ,其中 5min作用最明显 ,而 2 0min则有抑制作用。
2002年01期 14-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 56k] - 李家洲,刘耘,刘仲明,刘芳,郑文岭
利用自组装法 ,将 5’末端标记有巯基醇的单链DNA探针 ,固定在 4 43MHzAT切石英晶体的镀金表面 ,制成石英晶体DNA传感器 ,并用该DNA传感器进行了互补单链DNA定量定性检测的探索
2002年01期 16-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k] - 周钢,余细勇,林曙光
通过鉴别未知的cry4亚组基因来确定排除法PCR加变性梯度凝胶电泳新方法。方法 :应用排除法PCR的组基因和亚组基因引物扩增杀蚊毒素基因 ,cry4。这些引物是根据已知的cyr4基因的共有或特有DNA片段来设计的。组基因引物扩增产物被用于变性梯度凝胶电泳。平行变性梯度凝胶是由 8%的聚丙烯酰胺加上 2 0 %到 80 %的变性剂组成。结果 :已知的和未知的cry4亚组基因被组基因引物扩增的产物在变性梯度凝胶电泳被分离开。尽管它们之间仅有两个碱基对不同 (T在位置 2 2 4和G在位置 394)。应用组基因和亚组基因引物扩增 ,新发现的基因可被分类到次亚组基因水平。从 5个苏云金芽孢杆菌亚菌中发现三个未发表的cry4亚组基因。结论 :排除法PCR加变性梯度凝胶电泳是一个高度敏感、特异性和可靠性强的新方法 ,可用于鉴别各种未知的亚组基因。
2002年01期 17-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 125k] - 余升红
目的 :构建alpha珠蛋白基因片段反义表达载体 ,抑制重型beta地贫患者alpha珠蛋白基因的过量表达 ,为重型beta地贫基因治疗打下基础。方法 :采用PCR扩增alpha珠蛋白基因片段 80 7bp,反应条件 94℃ 30s ,6 8℃ 1min ,72℃ 2min,35个循环 ,然后将所扩增片段用Klenow大片段酶补平PCR产物末端 ,另外用HindⅢ酶切pLNSX ,用Klenow补平后 ,与补平末段的PCR产物平端连接 ,转化用CaCl2 制备的感受态细菌受体DH5α,用碱法提取所得克隆子质粒 ,电泳比较质粒大小 ,再用PCR初筛 ,最后用双酶切进行鉴定。结果 :经过质粒大小比较 ,PCR初筛 ,双酶切鉴定 ,得到 6个正向插入重组子。
2002年01期 20-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 64k] - 张恒
以大蒜为原料 ,采用溶剂抽提法对大蒜中SOD的分离进行研究。酶活力测定采用肾上腺素法。最大酶活力的选择与确定用正交试验法。当各抽提剂及萃取剂的使用量为pH7 8的磷酸缓冲液 (ml)与新鲜大蒜 (g)之比等于 1∶1、氯仿—乙醇混合液量为提取液的 2 5倍、丙酮量为粗酶液的一倍时 ,分离效果最佳。
2002年01期 21-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k] - 丁桂莲,朱爱堂,李建英
目的 :建立考马斯亮蓝法 (CS)检测重组碱性成纤维细胞生长因子 (r-bFGF)含量。方法 :以牛血清白蛋白 (BSA)为标准液 ,考马斯亮蓝 (CBG - 2 5 0 )为染色剂 ,检测 5 95nm吸光度并绘制标准曲线找出回归方程 ,对照r -bFGF样品计算含量。结果 :此法敏感性高 ,可测出 μg水平蛋白 ,标本量只需 5 0～ 10 0 μl,染料与蛋白的结合反应快 ,只需 2min即可比色 ,显色稳定 ,可维持 1h,重现性好 ,变异系数在 5 %以内。结论 :此法简便有效、灵敏性高 ,能快速检测r-bFGF含量。
2002年01期 22-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k] - 钱垂文,罗勇,张美英,林锋,王一飞
为比较 3种DEAE填料对rNM2 3-H1/NDPK -A的纯化效果 ,利用同一批中试发酵样品在相同的条件下进行离子交换层析 ,分别收集P0 2 和P1 0 两个洗脱峰。通过对洗脱峰中蛋白质含量、目标蛋白相对含量以及酶比活的测定 ,计算得出MatrexCellufineA - 2 0 0 ,DEAESephadexA - 2 5 ,Macro -PrepDEAESupport三种填料相对应的NDPK -A得率及纯化倍数分别为 74 5 %、40 8%、92 6 %、,2 4、1 9、3 1倍。综合分析表明Macro -PrepDEAESupport填料对rNM2 3-H1/NDPK -A的纯化效果最好。
2002年01期 23-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k] - 邵淑丽,徐兴军,邵会祥,王鑫,金术超
研究马铃薯渣发酵饲料部分替代兔日粮和与沙棘嫩枝叶配合使用部分替代兔日粮对兔肉质及免疫功能的影响。结果 ,30 %马铃薯渣发酵饲料 ,可提高兔日增重 5 1 0 5 % ,降低饲料消耗 (料重比 ) 2 1 2 5 % ,对兔肉品质 (蛋白质、氨基酸含量等 )无显著性影响 ,对兔肝脾肾重及脏体比、血细胞指标、血清指标 (血清总蛋白 ,白蛋白、球蛋白、尿素氮等含量及白球比 ;血清丙氨酸氨基转移酶 ,门冬氨酸氨基转移酶、谷草酶、谷丙酶、谷氨酸氨转移酶的活性血清碱性磷酸酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性 )无显著性影响。 30 %马铃薯渣发酵饲料与沙棘嫩枝叶配合使用 ,可提高兔肉蛋白质、脂肪、氨基酸含量 ,改善兔肉品质
2002年01期 24-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 63k] - 施大林,陆茂林,吕惠敏,陈金林
从猪血制备凝血酶 ,对丙酮沉淀法和离子交换树脂法进行了比较 ,结果表明 ,两种方法的得率分别为 2 30 0u/L和5 6 0 0u/L ,酶比活分别为 15u/mg和 36 5u/mg。
2002年01期 26页 [查看摘要][在线阅读][下载 21k] - 李江华,邬敏辰,房峻,邬显章
以黑曲霉WA30 1为生产菌固态发酵生产酸性 β -甘露聚糖酶 ,较适的培养基组成和培养条件为 :麸皮 10g,魔芋粉 0 4g,豆饼粉 1 5g,硫酸铵 0 2g ,起始湿度 5 5 % ,pH自然 ,发酵温度 35℃ ,发酵周期约 96h。在此条件下 ,WA30 1的酸性β-甘露聚糖酶产率为 95 0U/g干曲左右。
2002年01期 26-28页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k] - 张秀坤,李亚洁,都兴范,石理鑫,王林华
将皂质芦荟的茎段及幼苗作为外植体进行组织培养 ,试验结果表明 :皂质芦荟的茎段经 40d左右可诱导形成愈伤组织 ,再经 2 0d萌生再生芽 :幼苗培养需经 30d左右基部直接分化再生芽。同时经试验筛选出愈伤组织形成、再生芽分化和生根的最适培养基为 :MS +6 -BA 2 0mg/L +NAA 0 1mg/L、MS+6 -BA 3 0mg/L +NAA 0 1mg/L和MS +NAA 0 3mg/L。
2002年01期 28页 [查看摘要][在线阅读][下载 19k] - 张必武,邬小兵,乐国伟,施用晖2002年01期 28-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 40k]
- 吴潇韫,朱旭芬,钱朝东2002年01期 30-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
- 洪靖君,段家龙2002年01期 31-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k]
- 孙建和,严亚贤,陆苹2002年01期 32-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 62k]
- 黄卫,罗玉萍2002年01期 34-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 68k]
- 裴雁曦,陈竹君,曹家树2002年01期 36-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
- 张莉,李润植2002年01期 37-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 59k]
- 王晓利,张俊松2002年01期 39-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
- 陈冠军,秦梦华,曲音波,高培基2002年01期 40-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 68k]
- 李伟,梁建生,李幼荣,邱关明,潘宁2002年01期 42-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 67k]
- 于澄宇,胡胜武,郭蔼光2002年01期 44-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k]
- 潘进权,刘耘2002年01期 45-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 70k]
- 邵宏波,金萍2002年01期 47-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k]
- 曲际春,王莉2002年01期 48-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 36k]
- 周帼萍,贾君,黄家怿2002年01期 49-0页 [查看摘要][在线阅读][下载 34k]
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