- 朱德伟;陈心雨;张言周;康贻军;
[目的]明确克雷伯氏菌(Klebsiella sp.) TR5来源IS6蛋白的原核表达特性，验证其产物对四环素的降解效果。[方法] PCR扩增TR5中IS6蛋白的编码基因，构建pET28a(+)-IS16重组载体并转化至大肠杆菌BL21(DE)3,经IPTG诱导表达后，通过SDS-PAGE、Western blot验证表达产物。利用亲和层析纯化目的蛋白，测定其降解效率，结合LC-MS分析降解产物及途径。[结果]构建了IS6蛋白重组表达载体，成功表达分子量为28 kDa的IS16蛋白，浓度为188.92 mg/L。实验条件下四环素浓度由2 331.12 ng/mL降至491.86 ng/mL。LC-MS显示，IS6降解四环素过程中，分子量为461、431、417、415的组分有显著变化。其中，分子量461的组分含量显著降低，分子量431、417和415的组分含量明显提高。[结论]原核表达的IS6蛋白(188.92 mg/L)具有高效四环素降解活性，降解率为78.9%,为环境中四环素的降解提供了应用基础。
2026年01期 v.36;No.212 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 436K] - 陈莹;许子华;高欢;胡北;吴琼;
[目的]获取斑马鱼Aurora-A重组蛋白，并进行生物信息学分析。[方法]将Aurora-A基因和pET-SUMO质粒连接，转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达，利用亲和层析法分离纯化目的蛋白。从NCBI数据库下载斑马鱼Aurora-A氨基酸序列，采用在线工具分析其理化性质、结构与功能，通过MGEA 11构建进化树。[结果]重组Aurora-A在BL21(DE3)中主要为可溶性表达，经层析获得初步纯化的目的蛋白，分子量约63 kDa。生物信息学分析显示，斑马鱼Aurora-A由405个氨基酸组成，分子质量为45 447.57 Da,等电点为9.60,亚细胞可能定位于细胞质，无信号肽及跨膜区，含49个磷酸化位点，二级结构中α螺旋占23.70%,延伸链占12.35%,无规则卷曲占63.95%,亲缘关系与大西洋鲑最近。[结论]成功构建了斑马鱼Aurora-A的原核表达体系，实现了可溶性表达，得到了初步纯化的目的蛋白，并且预测了斑马鱼Aurora-A的生物学特征。
2026年01期 v.36;No.212 8-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 1074K] - 覃思娜;莫慧涓;韩正刚;朱美鑫;杨江科;
[目的]对大肠杆菌BL21漆酶进行理性设计改造，以提高其酶活性、pH稳定性，并探究其在黄曲霉毒素B1(AFB1)降解中的应用潜力。[方法]构建Lac2(S307T)、Lac4(V259IK446R)、Lac6(T23I)、Lac8(N450G)4个突变体并实现异源表达。通过测定其酶学性质筛选最优突变体，经高密度发酵提高产量，评估对AFB1的降解能力及产物组成。[结果]突变体Lac4表现最优，酶活13 465 U/L、蛋白含量490 mg/L,分别是野生型CueO-ΔSp的8倍(6 425 U/L)、2.9倍(165 mg/L)。所有突变体在pH值2～12均保留60%以上相对酶活，优于CueO-ΔSp。Lac4对AFB1的降解效率达98%,降解产物分子式为C_(14)H_(16)N_2O_2、C_(17)H_(12)O_7。[结论]理性改造显著提升了突变体的酶活性、pH值稳定性，其中Lac4可高效降解AFB1,为生物脱毒提供理论和技术支持。
2026年01期 v.36;No.212 14-21+134页 [查看摘要][在线阅读][下载 767K] - 胡艳玲;吕德强;马倩倩;苏正定;宋士奎;
[目的]定向改造3-酮类固醇9α-羟化酶(KSH)中KshA51亚基底物结合口袋残基，催化4-雄烯二酮(4-AD)合成类固醇药物中间体7α-羟基-4雄甾烯-3,17-二酮(7α-OH AD)。[方法]同源建模预测KshA51蛋白结构，经PyMOL软件分析活性中心关键残基，合成大肠杆菌(Escherichia coli)密码子偏好性kshA51基因片段，构建野生型及突变体质粒，转化至大肠杆菌BL21细胞制备粗酶液，KshA51与KshB122共表达催化4-AD转化。高效液相色谱仪(HPLC)检测7α-OH AD保留时间处峰面积占比、筛选最佳突变体，亲和层析法纯化KshA51野生型及突变体粗酶液，SDS-PAGE法检测目的蛋白表达。[结果] KshA51最佳突变体为D311Q,其与KshB122粗酶液1∶1组合，4-AD终浓度为5 g/L,助溶剂为0.4%吐温80,转化温度为30℃,在上述催化体系中7α-OH AD转化率达55.59%,目的蛋白均成功表达。[结论] KshA51底物结合口袋关键残基突变，使KSH催化类固醇C9-羟基化活性部分转为C7-羟基化活性，为生物合成7α-OH AD提供新路径。
2026年01期 v.36;No.212 22-29+13页 [查看摘要][在线阅读][下载 807K] - 耿蒙雨;戴雨欣;宋禹婷;方坤;徐志卿;杨予涛;
[目的]明确m~6A修饰相关蛋白ALKBH5、FTO、METTL3和YTHDF1对含GABPα基因3′-非翻译区双荧光素酶报告基因的调控作用。[方法]以大鼠内侧前额叶皮层脑区cDNA为模板，PCR扩增GABPα基因3′-UTR含有m~6A修饰位点的目的片段及大鼠FTO、METTL3和YTHDF1基因的编码区片段。将FTO、METTL3和YTHDF1的扩增产物克隆到pcDNA3.1中，将GABPα基因3′-UTR的扩增产物克隆到pmiR RB-Report~(TM)载体中。将pcDNA3.1-FTO、METTL3、ALKBH5、YTHDF1或空载体pcDNA3.1分别与双荧光素酶报告载体共转染HEK293细胞，转染48 h后检测荧光素酶活性。[结果]含有GABPα基因3′-UTR的双荧光素酶报告载体pmiR-GABPα-3′-UTR及含有FTO、METTL3和YTHDF1基因编码区片段的pcDNA3.1过表达载体均构建成功。荧光素酶活性分析表明，与空载体pcDNA3.1组相比，METTL3和ALKBH5均能下调其活性，其中METTL3处理组相对活性为0.60、ALKBH5处理组为0.66(P<0.05),但FTO和YTHDF1对其活性无显著影响(P>0.05)。[结论]初步证明大鼠GABPα基因3′-UTR存在m~6A修饰位点，m~6A修饰蛋白METTL3和ALKBH5可下调pmiR-GABPα-3′-UTR报告基因荧光素酶的活性。
2026年01期 v.36;No.212 30-36+7页 [查看摘要][在线阅读][下载 307K]
- 杨婧如;张旭妍;汪洋;胡翰;刘滨磊;
[目的]建立并验证基于16S rRNA的用于检测实验室污染菌的TaqMan qPCR和LAMP检测方法，作为细胞治疗产品无菌检测快速放行的新方法。[方法]在非GMP分子生物学和细胞生物学实验室多个方位分离纯化污染菌，针对分离到的细菌16S rRNA基因保守序列设计引物。对TaqMan qPCR及LAMP两种检测方法进行兼并性、灵敏度检测，并在GMP实验室生产的细胞治疗产品上进行验证，并与细菌培养法进行比较。[结果]建立的TaqMan qPCR和LAMP检测方法兼并性强，对蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、微球菌、玫瑰考克氏菌、大肠杆菌、嗜根考克氏菌多种污染菌均有扩增；TaqMan qPCR标准曲线在5.7×10~6 copies/μL～1.14×10~2 copies/μL范围内具有良好的线性关系，R~2>0.99,检测限(LOD)为5.7×10~1 copies/μL,定量下限(LLOQ)为1.14×10~2 copies/μL;在针对模拟样本检测中，TaqMan qPCR灵敏度是LAMP的1 000倍；在临床样本检测中，TaqMan qPCR、LAMP检测结果与培养法检测结果一致。[结论]建立并验证了针对实验室污染菌的的TaqMan qPCR和LAMP检测方法，为细胞治疗产品无菌检测的快速放行提供了新方法。
2026年01期 v.36;No.212 37-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 867K] - 姚羽;桂阳;朱国胜;刘宏宇;李彪;李岩;
[目的]探究保持冬荪(Phallus dongsun)菌种萌发率、萌发时间和生长速度等指标的液氮保藏工艺。[方法]以冬荪菌种“D-1”为研究对象，采用单因素-Plackett-Burman设计-响应面分析方法，探究保护剂、降温速度、解冻温度、外源物质、静置温度和静置时间对冬荪菌种生长情况的影响。[结果]确定液氮保藏工艺为20%PEG20000作为保护剂、5 g/L L-脯氨酸作为外源物质，9/4℃/min降至4℃、再以1℃/min降至-50℃作为降温方式，25℃作为解冻和静置温度，静置时间为3 h。萌发率为100%,萌发时间为2 d,菌丝生长速度为(1.18±0.14)mm/d,满板时间为(23±1)d,满瓶时间为(40±5)d,电导率为(974.00±5.00)μS/cm,脯氨酸含量为(24.18±0.35)μg/g, DNA甲基化水平为(2.39±0.11)%。[结论]与液氮保藏前相比，保藏后菌丝满板时间延长2～3 d,但继代后菌丝满板时间恢复21 d;菌丝满瓶时间延长0～5 d;电导率上升了24.2%、脯氨酸含量提高了79.91%,DNA甲基化水平无显著性差异。可见菌种在保藏过程中受到机械损伤但未发生退化，该工艺适用于冬荪菌种液氮保藏。
2026年01期 v.36;No.212 44-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 647K] - 徐攀;叶光辉;张雁君;孟爱莲;邱娅璐;袁箫;高鹏;
[目的]筛选新型耐辐射微生物并探究其抗性特征。[方法]从经8 kGy高能电子束辐照的手撕牛肉中筛选微生物，通过形态学观察和16S rRNA序列分析进行鉴定。通过检测其在不同剂量γ射线辐照、不同种类及浓度抗生素处理下的存活情况，以及在高温、酸碱、高盐、干旱、重金属胁迫下的生长曲线，分析其对极端环境的抗性能力。[结果]共筛选到12株微生物，其中菌株ZXP-05可耐受10 kGy剂量~(60)Co-γ射线辐照，经鉴定为抗辐射不动杆菌(Acinetobacter radioresistens)。菌株ZXP-05在PBS缓冲液、~(60)Co-γ射线辐照下D_(10)值为4.545 kGy。在选取的10种抗生素中，只对氨苄西林、羧苄西林、甲氧西林、氯霉素具有耐药性。在30～40℃、NaCl浓度<2%、pH 6.0～9.0条件下生长良好，且可在NaCl浓度3%～5%,pH 5.0和10.0,PEG6000≤20%,Cd~(2+)≤20 mg/L,Ni~(2+)≤200 mg/L的环境中生长。[结论]抗辐射不动杆菌ZXP-05可耐受10 kGy剂量~(60)Co-γ射线，对部分抗生素耐药，且能在弱酸弱碱、高盐、干旱、重金属胁迫下生长。
2026年01期 v.36;No.212 52-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 708K] - 张羽萍;吴必浩;张海伟;胡松;龚睿;
[目的]探究影响呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)F蛋白(Fusion protein, F蛋白)与宿主细胞表面受体相互作用的因素。[方法]利用流式细胞术观察F蛋白与敏感细胞表面受体的结合情况，并检测了F蛋白与胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor, IGF1R)在分子水平的相互作用；利用流式细胞术观察F蛋白表面糖基化修饰对其与敏感细胞表面受体结合的影响；利用抗体阻断实验检测了靶向F蛋白各表位的中和抗体对F蛋白受体结合域的竞争，并通过Prism-GraphPad软件对中和抗体的阻断率和中和活性进行了相关性分析。[结果] F蛋白与敏感细胞表面受体高效结合；F蛋白在去除表面糖基化修饰后结合率降低了59.6%,结合能力明显下降；靶向F蛋白??、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ表位的中和抗体竞争F蛋白的受体结合域，阻断率分别为49.7%、33.7%、50.5%、58.5%;且中和抗体的阻断率与其中和活性呈正相关(r>0.8,P<0.05)。[结论] F蛋白能够与敏感细胞表面受体结合，去除其表面糖基化修饰、抗体竞争其受体结合域的方式能够影响两者的相互作用，进而为疫苗、药物的研发提供线索。
2026年01期 v.36;No.212 60-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 734K]
- 张二帅;段海潇;汪洋;刘滨磊;
[目的]评估VV-D42对CT26荷瘤小鼠的抗结直肠癌治疗效果。[方法]同源重组构建质粒pSC65-mlgG Kappa SP-D42,与VV-FLUC-GFP病毒共转染构建重组牛痘病毒VV-D42;CCID_(50)法测定VV-D42病毒滴度，蛋白免疫印迹检测D42蛋白表达，CCK-8法分析对CT26细胞的杀伤活性。基于CT26荷瘤小鼠模型，通过VV-FLUC-GFP给药确定最佳给药剂量，再以VV-D42给药验证体内疗效。[结果] VV-D42病毒构建成功，滴度可达1×10~8 CCID_(50)/mL;VV-D42感染CT26细胞后表达D42蛋白；VV-D42体外实验中抑制CT26的细胞活性；在荷瘤小鼠中，高剂量VV-FLUC-GFP瘤内给药组的平均肿瘤体积(631.29±205.62 mm~3)较对照组(1 494.14±166.76 mm~3)相比具有显著性差异(P<0.01),确定最佳给药剂量为1×10~7 CCID_(50)/只小鼠；在VV-D42治疗肿瘤小鼠模型中，除VV-FLUC-GFP静脉组，其余实验组平均肿瘤体积与对照组相比均有显著性差异。[结论] VV-D42静脉组平均肿瘤体积(929.46±116.72 mm~3)与VV-FLUC-GFP静脉组(1 419.37±73.98 mm~3)相比具有显著性差异(P<0.01),证明VV-D42在体内可以抑制结直肠癌的生长，为结直肠癌治疗提供潜在策略。
2026年01期 v.36;No.212 68-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 528K] - 石理冉;贾天宇;王晓蕾;王艳;
[目的]探讨LncRNA UC.360 shRNA (UC.360 shRNA)对P2X7受体介导的神经病理痛的作用及潜在机制。[方法]建立2型糖尿病大鼠模型，行为学检测机械痛敏、热痛敏变化，RT-PCR检测P2X7受体mRNA表达，蛋白印迹检测P2X7受体蛋白、炎性因子TNF-α、IL-1β、信号通路ERK1/2 MAPK的表达。[结果] DM组大鼠经UC.360 shRNA处理后，第7 w～第10 w,机械缩足反射阈值从17.91 g±1.59 g升至21.03 g±1.03 g。热缩足反射阈值从22.63 s±1.51 s升至25.38 s±1.06 s。P2X7受体mRNA、蛋白表达分别从3.02±0.45、3.47±0.73降至1.77±0.35、1.78±0.86。TNF-α、IL-1β蛋白分别从0.91±0.38、1.36±0.42降至0.39±0.20、0.34±0.11。p-ERK1/2蛋白表达从0.37±0.13降至0.12±0.04。[结论] UC.360 shRNA可缓解2型糖尿病大鼠的神经病理痛。
2026年01期 v.36;No.212 75-80+126页 [查看摘要][在线阅读][下载 450K] - 王瑜;童璐瑶;石宇彤;罗建蓉;
[目的]利用急性髓系白血病(AML)中胆固醇代谢相关基因构建风险评分预后模型，验证其准确性，多组学方法探讨该模型的临床预测价值。[方法]基于TCGA、GeneCards数据库对AML中胆固醇代谢相关基因进行单变量Cox回归分析得到预后基因并进行GO和KEGG富集分析，结合患者临床信息通过Lasso回归分析筛选出特征基因，并构建预后风险评分模型。通过Kaplan-Meier生存曲线和受试者工作特征(ROC)曲线验证预后模型准确性，并分析模型与免疫浸润、化疗反应的相关性。在TCGA-LAML队列中进行随机生存森林分析确定关键基因，采用定量逆转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测关键基因在健康人群与患者中的表达差异。[结果]构建了以18个基因为特征的白血病预后模型。Kaplan-Meier生存曲线和ROC曲线分析表明该模型具有良好预测效能。多组学分析表明，风险评分与免疫浸润、化疗反应显著相关。实验显示，关键基因FHL1、PTPN1、MBTPS1、EBP在AML样本中表达明显异常。[结论]该预后模型可准确预测AML患者预后，4个关键风险基因或为AML患者提供潜在的预后生物标志物和治疗选择。
2026年01期 v.36;No.212 81-92页 [查看摘要][在线阅读][下载 2414K] - 熊璐;苑雪萍;许琳;徐冲;韩旭东;
[目的]探究真核翻译延伸因子1E1(EEF1E1)表达对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响。[方法]将SKOV3细胞分3组(1×10~8个细胞/组):NC对照组、EEF1E1-siRNA组(转染50 nmol/L EEF1E1-siRNA)、pcDNA3.1-EEF1E1组(转染50 nmol/L过表达质粒pcDNA3.1-EEF1E1),处理48 h后用MTT法测定细胞增殖，Transwell实验评估侵袭迁移能力，Annexin V-FITC/PE双染、流式细胞术分析细胞凋亡与周期分布。[结果]与对照组相比，EEF1E1-siRNA组细胞增殖活性显著增强(P<0.000 1),pcDNA3.1-EEF1E1组显著降低(P<0.000 1);EEF1E1-siRNA组侵袭迁移能力增强(P<0.000 1),pcDNA3.1-EEF1E1组减弱(P<0.000 1)。流式检测显示，EEF1E1-siRNA组凋亡减少、G1期比例下降；pcDNA3.1-EEF1E1组凋亡增加、G1期比例上升。[结论] EEF1E1可抑制卵巢癌细胞增殖与侵袭迁移，促进细胞凋亡并阻滞细胞周期进展。
2026年01期 v.36;No.212 93-98页 [查看摘要][在线阅读][下载 537K] - 吴友鹏;陈海婷;沈阳;王俊茹;卞伟钢;
[目的]探究SENP1调控MPHOSPH9类泛素化修饰对胃癌细胞转移的影响。[方法]选取2021年6月-2023年9月收治的36例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织。将胃癌MKN-45细胞随机分为3组(5×10~5个细胞/组):si-NC组(加入10μL、50 nmol/L si-NC处理)、si-SENP1组(加入10μL、50 nmol/L si-SENP1处理)、si-MPHOSPH9组(加入10μL、50 nmol/L si-MPHOSPH9处理)。通过蛋白免疫印迹实验检测胃癌组织和癌旁组织SENP1、MPHOSPH9的表达水平；EdU染色法分析不同组别MKN-45细胞的增殖能力；Transwell实验分析不同组别中MKN-45细胞的侵袭与迁移能力；蛋白免疫印迹与免疫沉淀实验分析MPHOSPH9的类泛素化修饰。[结果]胃癌组织中SENP1、MPHOSPH9表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。与si-NC组相比，si-SENP1组、si-MPHOSPH9组的MKN-45细胞增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05),MPHOSPH9表达降低(P<0.05)。MPHOSPH9能够与类泛素化修饰蛋白1相互作用，si-SENP1组MKN-45细胞中类泛素化修饰蛋白1表达水平上调(P<0.05)。[结论]下调SENP1和MPHOSPH9均能抑制胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移及侵袭能力，与SENP1诱导MPHOSPH9去类泛素化修饰密切相关。
2026年01期 v.36;No.212 99-103+126页 [查看摘要][在线阅读][下载 281K] - 麻瑀琪;王宝;赵治伟;王红英;钱斯日古楞;
[目的]获取兼具高生物量与高富硒量的优质富硒酵母发酵条件。[方法]选用酿酒酵母作为起始菌种，将生物量和富硒量作为评估指标，运用二次发酵法和响应面法，对目标菌株的生长条件以及富硒条件进行优化。[结果]研究发现，当该菌株的培养条件为初始pH 6.5、接种量1%、30℃培养36 h时，酵母生长状况最佳。在富硒发酵条件为初始pH 5.6、28℃、接种量1.5%、转速160 r/min,并在11.5 h加入浓度为100μg/mL的亚硒酸钠，培养2 d后，富硒效果最优，富硒量能达到5 711.7μg/g,生物量也达到了20.3 g/L。[结论]所建立的酿酒酵母富硒体系为富硒酵母产业发展提供了创新解决方案。
2026年01期 v.36;No.212 104-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 7857K]