生物技术


论著

  • 决明丙二酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆及序列分析

    张赶;刘祖碧;李娟娟;俞继华;李洋洋;廖海;周嘉裕;谭睿;

    [目的]克隆决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)基因并做序列分析。[方法]采用RACE法从c DNA中扩增出决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)的CDS全长序列,推测出MCAT基因编码的氨基酸序列并进行序列分析。[结果]分析结果显示MCAT的CDS全长1 253bp,编码405个氨基酸。通过序列比对分析发现决明MCAT蛋白包含一个酰基转移酶超家族结构域,并且发现了一段高度保守的七肽模序。[结论]获得了决明MCAT的CDS全长,其编码的蛋白可能催化丙二酰Co A的转酰基反应,为决明脂肪酸的合成通路的阐明以及后期的决明脂肪酸的基因工程研究打下了坚实的基础。

    2015年02期 v.25;No.147 103-108页 [查看摘要][在线阅读][下载 487K]
  • 人白细胞介素-36受体拮抗剂基因的克隆及序列分析

    彭笑;袁仙丽;潘秀和;高巧艳;李燕;李明才;

    [目的]构建人白细胞介素-36受体拮抗剂(interleukin-36 receptor antagonist,IL-36Ra)的真核表达载体,并对其基因全长编码区进行分析。[方法]提取总RNA,逆转录出IL-36Ra c DNA序列。设计人IL-36Ra基因的上游引物和下游引物。利用热启动PCR扩增目的基因,将扩增出的IL-36Ra基因编码区通过限制性内切酶酶切后,把酶切的目的片段与载体pc DNA3.1连接,转化到感受态细胞大肠杆菌DH5α中。通过氨苄青霉素抗性筛选、双酶切及菌落PCR鉴定,最后选取阳性克隆进行测序。[结果]重组载体pc DNA3.1-h IL-36Ra经菌落PCR和酶切鉴定,最后通过序列分析证实,其序列与Gen Bank中数据一致。[结论]人IL-36Ra基因的重组真核表达载体pc DNA3.1-h IL-36Ra的成功构建,为进一步研究IL-36Ra在免疫性疾病中的作用奠定了实验基础。

    2015年02期 v.25;No.147 109-112+127页 [查看摘要][在线阅读][下载 314K]
  • 铁蛋白重链亚铁氧化酶活性突变体的构建及鉴定

    柳彩芝;苗青;薛建奇;潘书红;段相林;樊玉梅;

    [目的]构建小鼠铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)亚铁氧化酶活性突变基因的真核表达载体。[方法]针对小鼠FTH基因的亚铁氧化酶活性关键位点(K86、E62和H65),设计并合成6条PCR引物。利用重叠延伸PCR技术,获得小鼠FTH基因的突变体m FTH(K86Q、E62K和H65G),简写为m FTH(3M)。然后将m FTH(3M)插入到实验室已有的C端带Flag标签的真核表达载体pc DNA3中,插入位置为多克隆位点区域中限制性内切酶Bam HⅠ和HindⅢ之间,从而得到亚铁氧化酶活性缺失的FTH真核表达载体pc DNA3-m FTH(3M)-Flag。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,用脂质体lipofectamineTM2000将其转染到RAW264.7细胞中,检测细胞中带有Flag标签的m FTH(3M)蛋白的表达。[结果]重组质粒酶切得到预期片段,测序显示所构建的m FTH(3M)真核表达载体序列正确,细胞内检测到带Flag标签的m FTH(3M)蛋白信号的强烈表达。[结论]实验成功构建了小鼠FTH亚铁氧化酶活性位点基因突变的真核表达载体pc DNA3-m FTH(3M)-Flag。

    2015年02期 v.25;No.147 113-118+123页 [查看摘要][在线阅读][下载 351K]
  • 人TRAF3IP3基因剪接异构体2的克隆表达和生物信息学分析

    王沂;杨文思;赵俊暕;石峻;戚晓渊;郑永强;牛艳艳;王洋;

    [目的]克隆、原核表达并纯化人类TRAF3IP3基因剪接异构体2(TRAF3IP3iso2),对TRAF3IP3iso2蛋白进行生物信息学分析。[方法]从人骨髓单个核细胞c DNA中扩增TRAF3IP3iso2开放阅读框区,双酶切连入原核表达载体p ET-28a(+),重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达效果,Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白;根据测序结果对TRAF3IP3iso2蛋白进行生物信息学分析。[结果]成功克隆了人类TRAF3IP3iso2编码区并构建了原核表达载体p ET-28a(+)-TRAF3IP3iso2,在大肠杆菌中诱导表达、纯化获得了相对分子量约22.7k Da的融合蛋白;生物信息学分析显示TRAF3IP3iso2蛋白二级结构以α螺旋为主,无TRAF3IP3iso1蛋白的跨膜区结构。[结论]证明了人类TRAF3IP3iso2的存在,为TRAF3IP3功能的研究提供了实验依据。

    2015年02期 v.25;No.147 119-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
  • 金环蛇抗菌肽在毕赤酵母中的组成型表达

    郝思怡;姚远航;郭土敬;张鸿;李黄金;

    [目的]建立金环蛇抗菌肽Cath-BF的毕赤酵母高效分泌表达系统。[方法]Cath-BF基因用引物重叠延伸法合成,克隆于p GAPZa-A,电转化毕赤酵母SMD1168,博莱霉素筛选高抗性转化子,以痤疮丙酸杆菌筛选抗菌肽高效分泌株,摇瓶培养确定分泌表达最适p H值。[结果]获得Cath-BF的毕赤酵母高效组成型分泌表达株,表达产物可有效抑制痤疮丙酸杆菌的生长,抗菌肽分泌水平与培养基p H值高度相关。[结论]成功构建金环蛇抗菌肽Cath-BF组成型高效分泌表达系统。

    2015年02期 v.25;No.147 124-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K]
  • 可诱导型CRISPRi系统的构建及其初步应用

    陈新玉;庞德剑;欧小利;姜勇;梅柱中;

    [目的]构建可诱导型CRISPRi系统以特异性地抑制靶基因的表达。[方法]采用PCR技术将人ZNF10基因的KRAB结构域编码序列分别克隆至d Cas9蛋白编码基因的5’端(KRAB-d Cas9)与3’端(d Cas9-KRAB)。设计并构建靶向荧光素酶报告基因起始密码子附近序列的4种gRNA表达载体,其表达受到含有Tet O调控元件的H1启动子调控。分析共表达d Cas9蛋白和gRNA对共转染的荧光素酶报告基因表达水平的影响。在此基础上,设计并构建靶向人KLHL21基因转录起始位点附近区域的3种gRNA表达载体,将其与KRAB-d Cas9融合表达载体分别共转染HEK293T细胞,24h后收集细胞并采用荧光实时定量PCR与蛋白质印迹技术分析KLHL21基因表达水平的变化。[结果]CRISPRi系统有效地抑制HEK293T细胞中荧光素酶报告基因与内源性的KLHL21基因的表达。共表达TetR抑制蛋白可阻断CRISPRi对荧光素酶报告基因表达的抑制作用,在细胞培养基中加入1μg/ml盐酸四环素可解除这种抑制作用。[结论]成功构建了可诱导型CRISPRi系统,可有效抑制真核细胞基因的表达。

    2015年02期 v.25;No.147 128-132页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K]
  • 光滑鳖甲肽聚糖识别蛋白的生物信息学分析

    徐鑫;王鹏;刘忠渊;

    [目的]预测光滑鳖甲肽聚糖识别蛋白的结构与功能。[方法]采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析,同时构建其编码产物的系统进化树。[结果]此蛋白的理论分子量为21.882 k D,包含一个由20个氨基酸组成的信号肽,属亲水蛋白,分泌到胞外发挥作用,可能具有信号转导和响应胁迫与免疫反应的功能,与赤拟谷盗的同源性最高,具有能够与肽聚糖结合的保守的PGRP结构域和一个Ⅱ型酰胺酶结构域。[结论]光滑鳖甲肽聚糖识别蛋白Ap PGRP-FD1基因克隆成功,生物信息学分析及结合蛋白质结构与功能预测可为深入研究ApPGRP-FD1提供理论指导。

    2015年02期 v.25;No.147 133-137+164页 [查看摘要][在线阅读][下载 348K]
  • SGTA基因及其蛋白的生物信息学分析

    顾取良;陈佳园;郐一贺;胡曦文;杨永霞;王丽京;

    [目的]对SGTA基因及其蛋白的结构和特征进行生物信息学分析,为研究SGTA与肿瘤形成和发展的相关性提供理论基础。[方法]运用生物信息学数据库和软件对SGTA基因的结构、单核苷酸多态性位点(SNP)、SGTA基因与其他基因的相互作用网络、SGTA蛋白的理化性质、二级结构、蛋白结构域、蛋白翻译后修饰、蛋白质之间相互作用网络进行分析。[结果]人SGTA基因有5种可变剪接产物,编码区存在78个SNP位点,其中错义突变31个,无义突变1个。人SGTA蛋白由313个氨基酸组成,是稳定性不高的亲水蛋白,α-螺旋是其主要二级结构元件,属于TRP超家族,预测有3个磷酸化激酶修饰位点和数个潜在泛素化修饰位点。与SGTA存在相互作用的基因和蛋白多数与维持体内蛋白质稳定的分子伴侣功能相关。[结论]SGTA基因及其蛋白的生物信息学分析为进一步实验研究其在肿瘤形成和发展中的地位及调控机制奠定了基础。

    2015年02期 v.25;No.147 138-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K]

技术与方法

  • 宽叶缬草DNA的提取及正交优化RAPD反应体系

    钱志瑶;周道堂;黄秀平;周镁;陈祖云;覃容贵;

    [目的]确定适合宽叶缬草RAPD分析的DNA提取方法以及建立最佳RAPD反应体系。[方法]比较宽叶缬草基因组DNA的两种提取方法(经典CTAB法、试剂盒法);采用正交设计L16(45),针对Taq DNA聚合酶浓度,d NTP浓度,Mg2+浓度,引物浓度,DNA模板浓度进行RAPD扩增,确立最佳RAPD反应体系。[结果]综合比较,试剂盒法较适合宽叶缬草基因组DNA提取;25μl最适宽叶缬草RAPD反应体系为:2.0 U Taq DNA聚合酶、0.4 mmol/L d NTP、4.0 mmol/L Mg2+、4.0μmol/L随机引物、60 ng模板DNA、2.5μl 10×buffer。[结论]试剂盒DNA提取法和正交优化的反应体系适用于宽叶缬草的RAPD分析,为进一步研究黔产宽叶缬草药材遗传多样性奠定了基础。

    2015年02期 v.25;No.147 143-146+132页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
  • 五味子果色相关的SRAP标记鉴定

    张庆田;李昌禹;许培磊;李晓艳;王振兴;赵滢;艾军;

    [目的]寻找与五味子果实颜色相关的分子标记为辅助育种提供技术支持。[方法]利用SRAP技术对五味子不同果实颜色(白果、黄果与红果)的DNA多态性进行分析。[结果]共筛选引物对120个组合,获得2个与果实颜色基因有关的特异条带ME1-EM15-129bp、ME3-EM12-420bp,其中ME3-EM12-420bp成功转化成SCAR标记。[结论]2个标记可对五味子不同果实颜色进行分子鉴定,结果稳定可重复性高。

    2015年02期 v.25;No.147 147-150页 [查看摘要][在线阅读][下载 579K]
  • 人尿道上皮细胞T7噬菌体展示cDNA文库的构建与鉴定

    朱有葱;何军;游晓星;朱翠明;李冉辉;曾焱华;

    [目的]构建人尿道上皮细胞(SV-HUC-1)T7噬菌体展示c DNA文库,为研究人尿道上皮细胞与生殖道感染病原体的相互作用奠定基础。[方法]用Trizol试剂提取SV-HUC-1细胞总RNA,分离纯化出mRNA,经反转录合成得到其双链c DNA,在双链c DNA末端加上定向的EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端,然后收集并纯化200bp以上的双链c DNA片段,连接于T7噬菌体载体,经体外包装后转入BLT5403宿主菌,T7噬菌体展示c DNA文库构建成功。[结果]将文库扩增后,用噬斑试验检测其库容,结果为1.2×106pfu/cm3。用PCR鉴定随机挑取的噬菌斑,计算其重组率达93.75%,且插入片段都大于200bp。[结论]成功构建了SV-HUC-1细胞T7噬菌体展示c DNA文库,为下一步研究泌尿生殖道感染病原体与人尿道上皮细胞的相互作用奠定了前期实验基础。

    2015年02期 v.25;No.147 151-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 206K]
  • PCR-DGGE技术解析东北稻田蓝藻群落结构

    曹焜;荆瑞勇;刘俊杰;郭永霞;王光华;

    [目的]明确东北稻田生态系统蓝藻群落结构组成变化及主要驱动因子。[方法]采用蓝藻特异性引物GC-Cya-b-F371和Cya-R783对采自东北不同土壤类型稻田土壤及田面水提取的DNA进行PCR扩增,采用DGGE电泳和条带测序技术解析稻田蓝藻群落结构。[结果]多样性指数表明,土壤中蓝藻群落结构比田面水体丰富。图谱冗余分析(RDA)显示,稻田土壤中蓝藻群落结构具有明显的地域差异,土壤碳氮比值是驱动土壤蓝藻分布的主要环境因素;而田面水体蓝藻群落结构地域差异不明显,p H值是驱动水体蓝藻分布的主要环境因素。DGGE条带测序发现,稻田蓝藻群落结构组成以丝状颤藻亚纲蓝藻(Oscillatoriophycideae)为主,一些条带基因序列与已知蓝藻相似度低于97%。[结论]东北稻田生态系统蓝藻群落结构复杂多样,生存着一些未知的蓝藻种群。

    2015年02期 v.25;No.147 155-160+172页 [查看摘要][在线阅读][下载 312K]
  • 甘薯SRAP指纹图谱构建及遗传多样性分析

    张安世;张利民;徐九文;

    [目的]利用分子标记SRAP技术,构建22个甘薯品种的DNA指纹图谱并进行遗传多样性分析。[方法]从49对SRAP引物中筛选了11对引物进行PCR扩增。[结果]共扩增出98条带,多态性条带74条,多态性比率为75.5%,平均每对引物扩增8.91条带。利用引物Me2-em3和Me3-em7,构建了22个甘薯品种的指纹图谱。聚类结果显示,在阈值为15.5时可将22个甘薯品种被分为7类。[结论]地理来源相同的甘薯品种和具有同一亲本的甘薯品种聚在了一起。

    2015年02期 v.25;No.147 161-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K]
  • 鹅喉羚线粒体D-loop和Cytb序列遗传多样性分析

    吕雪峰;阿布力孜·阿布力米提;宫平;高维明;段新华;邢巍婷;丁新民;郑文新;

    [目的]为了探讨新疆天山野生动物园17只鹅喉羚的遗传多样性、亲缘关系和群体来源。[方法]对这些鹅喉羚线粒体控制区(D-loop)和细胞色素b(Cytb)基因序列进行了PCR扩增和测序,分别计算了群体单倍型多样度(H)和核苷酸多样性(Pi)以及个体间的遗传距离,并构建了单倍型NJ(Neighbor-Joining)聚类图。[结果]D-loop区和Cytb分别获得了978bp和543bp的基因片段,D-loop区识别出11个单倍型,Cytb区识别出3个单倍型;D-loop和Cytb的单倍型多样度(H)和核苷酸多样性(Pi)分别为0.863、0.01028和0.330、0.00077;个体之间最大遗传距离为0.024,最小遗传距离为0.001;17只鹅喉羚分别聚为2个分支。[结论]该鹅喉羚群体D-loop区多态性较丰富,在野外可能来自两个不同的群体。

    2015年02期 v.25;No.147 165-168+184页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
  • 抗金葡菌深海真菌的分离鉴定及抑菌谱研究

    王硕;孟庆丽;武天娇;赵胜楠;权春善;金黎明;

    [目的]从深海淤泥样品中分离筛选具有抗金葡菌特性的真菌菌株,对其进行鉴定,并研究其抑菌谱。[方法]采用稀释涂布平板法分离真菌菌株,对峙培养法初筛,琼脂扩散法复筛,将抑菌效果最好的菌株进行形态鉴定、镜检、26S r DNA鉴定,并研究其对产黄青霉、尖孢镰刀菌、黄瓜菌核、木霉、盘单毛孢、平头刺盘孢霉6种真菌和大肠埃希氏菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、鼠伤寒沙门氏菌4种细菌的抑制作用。[结果]得到1株抑制金葡菌效果最佳的菌株,编号1B12,其抑菌圈直径为35.31 mm,鉴定结果为外瓶霉属(Exophiala),其对上述6种真菌和4种细菌都有一定的抑制作用。[结论]1B12是一株具有广谱抗菌性的海洋真菌。

    2015年02期 v.25;No.147 169-172页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]

开发与应用

  • RBM5荧光原位杂交探针的制备及应用

    代建丽;吴萍;

    [目的]研究RBM5(RNA-binding motif protein 5)荧光探针的制备方法,确立RBM5荧光探针用于肺癌组织检测的原位杂交技术体系。[方法]以RP11-493K19菌株为材料,提取含有RBM5的质粒进行PCR验证,采用缺口平移法制备RBM5荧光探针,并与人肺癌组织石蜡切片进行杂交实验建立肺癌荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)的检测体系。[结果]RBM5 15℃标记12h可获得合适的探针,探针与样本杂交后样本细胞内出现清晰明亮的绿色荧光信号,通过与呈橘红色荧光信号的CEP-3探针比较,可以判断肺癌细胞是否存在RBM5的缺失。[结论]RBM5探针制备的最佳条件是15℃标记12h,FISH实验的参数为10μg/ml蛋白酶K处理样本100 min、探针与样本37℃杂交16h、2×SSC/0.3%NP-40洗涤杂交样本5min。该实验体系适用于肺癌组织RBM5的FISH检测。

    2015年02期 v.25;No.147 173-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K]
  • 基因修饰乳酸乳球菌作为药物发送载体系统治疗黑色素瘤初探

    李轶杰;刘欢欢;张富春;

    [目的]探讨携带自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的重组乳球菌静脉注射后靶向实体肿瘤组织定殖及联合更昔洛韦(GCV)治疗小鼠黑色素瘤的可能性。[方法]荷瘤小鼠静脉注射乳球菌3d或7d后,将小鼠脾肺肝肾器官和肿瘤组织细胞匀浆后涂布于筛选培养基上,以乳酸菌数量的评价静脉发送乳球菌靶向定殖肿瘤细胞的可能性。以携带HSVtk的重组乳酸乳球菌经静脉途径处理荷瘤小鼠后,通过观测小鼠肿瘤体积变化及小鼠存活率评价相关抗肿瘤效果。[结果]静脉注射乳酸乳球菌3d后在小鼠脾肺肝肾和肿瘤组织内均有乳球菌检出,而7d后仅在肿瘤组织中发现有乳酸乳球菌的分布。与对照相比,静脉注射LL-HSV-tk联合GCV处理能显著抑制小鼠体内肿瘤的生长。[结论]静脉发送携带治疗性分子的乳酸乳球菌能靶向实体肿瘤组织定殖并抑制肿瘤的生长。

    2015年02期 v.25;No.147 176-179+190页 [查看摘要][在线阅读][下载 231K]
  • 重组骆驼蓬脂转移蛋白对宫颈癌HeLa细胞化疗的增敏作用

    管珊;王燕;赵晶;彭永玉;吕慧;孙素荣;

    [目的]研究重组骆驼蓬脂转移蛋白(recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)协同对宫颈癌He La细胞的抑制作用及可能的作用机制。[方法]四甲基偶氮咗蓝(MTT)法检测He La细胞生长的抑制率;Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的变化情况。[结果]r Ph LTP与DDP联合应用后与相应的DDP组相比,对细胞生长的抑制率显著增强(P<0.01),低浓度r Ph LTP联合2.5μg/m L顺铂对He La细胞的抑制率为(42.50±0.059)%,远高于高浓度顺铂(10μg/m L)对He La细胞的抑制率(36.88±0.134)%,细胞的凋亡率显著增加(P<0.01),细胞内ROS极明显升高(P<0.001)。[结论]r Ph LTP能够显著增强顺铂对He La细胞的化疗敏感性(P<0.001),这种作用可能与r Ph LTP增强顺铂诱导细胞内活性氧的产生导致细胞凋亡有关。

    2015年02期 v.25;No.147 180-184页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K]
  • M-CSF与L929细胞培养上清诱导分化骨髓巨噬细胞的差异分析

    王义乾;李雪;雷山;赵舒祺;姜勇;刘靖华;

    [目的]通过比较常用的M-CSF与L929细胞培养上清两种诱导方式获得骨髓巨噬细胞(BMDM)的形态及基本生物学功能,为选择制备BMDM的方法提供实验依据。[方法]用两种方式诱导小鼠骨髓获取BMDM,然后分别利用Zeiss荧光显微镜和流式细胞仪比较BMDM的细胞形态及纯度;通过吞噬实验、杀菌实验以及液相芯片技术(liquid chip)比较两组BMDM的生物学功能;同时将上述结果与体内分化成熟的腹腔巨噬细胞相比较。[结果]两组诱导分化成熟的BMDM均呈现不规则形或梭形;BMDM的纯度分别为M-CSF组98.6%,L929上清组99.6%;腹腔细胞贴壁后巨噬细胞的纯度是98.8%;吞噬实验、杀菌实验两组之间及其与腹腔巨噬细胞相比无显著差异;炎症因子释放水平检测中3组细胞存在IL-6或TNF-α某些时间点释放水平差异。[结论]M-CS与L929上清诱导方式所获得BMDM的形态相似,纯度相近(98.6%比99.6%),吞噬细菌能力无显著统计学差异(21.31±5.83比26.10±6.11,t=-0.745,P>0.05),杀菌能力无显著差异(杀菌30min:36.41%±4.21%比39.53%±6.75%;60min:44.35%±6.75%比45.27%±1.96%,两者均P>0.05),但是炎症因子释放的某些时间点有差异(TNF-α的释放在LPS刺激后24 h M-CSF组高于L929组:549.92±412比271.47±432,t=-0.34,P<0.05),应根据实验目的选择获取BMDM的诱导方式。

    2015年02期 v.25;No.147 185-190页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K]
  • 单细胞因子支持人胚胎干细胞生长的培养体系

    许慧芳;陈国华;黎逢光;陈红;张苏明;

    [目的]为2株中国人胚胎干细胞系建立培养液中仅添加1种细胞因子的培养体系。[方法]两株人胚胎干细胞h ES-846XX和h ES-18 46XY分别使用含有成纤维细胞生长因子(b FGF)160ng/ml、转化生长因子(TGFβ1)20ng/ml和noggin 200ng/ml的培养液进行无饲养层培养,观察细胞的生长情况并对所得细胞进行鉴定。[结果]培养液中添加b FGF 160ng/ml可以有效地支持人胚胎干细胞的长期增殖,传代8次的细胞仍然保持胚胎干细胞的特性。添加TGFβ1或noggin的培养基无法维持人胚胎干细胞的长期增殖,3代以后细胞完全分化。[结论]证明培养液单独添加高浓度b FGF 160ng/ml支持2株中国人胚胎干细胞长期保持未分化状态增殖,实际未分化率为68.2±1.08%。

    2015年02期 v.25;No.147 191-195页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K]
  • 胶质射脉革菌漆酶的复合诱导及其脱色性能

    徐春燕;高迎荣;王晓瑜;韩玉亭;

    [目的]研究复合诱导对胶质射脉革菌BBEL0901产漆酶的影响及其粗酶液对染料的脱色性能。[方法]采用分光光度法测定漆酶活性及其染料脱色性能。[结果]甘草渣和Cu2+对BBEL0901产漆酶均有促进作用,于发酵的第6 d向含甘草渣的低氮培养基中添加Cu2+(0.5 mmol/L)对漆酶的协同诱导作用最显著,活性达325.1 U/m L,分别为Cu2+单独诱导、甘草渣单独诱导和未诱导的4倍、14.4倍和19.8倍。粗酶液对不同结构的染料均有较强的脱色能力,对三苯甲烷类染料的脱色效果最好,脱色率达80%以上。[结论]甘草渣与Cu2+对BBEL0901漆酶具有协同诱导作用,酶活最高可达325.1 U/m L,产业化潜力大,所得粗酶液在染料脱色方面具有良好的应用前景。

    2015年02期 v.25;No.147 196-200+195页 [查看摘要][在线阅读][下载 304K]
  • 响应面法优化细菌MY07产IAA液体发酵培养基

    吴翔;甘炳成;谢丽源;谭昊;黄忠乾;彭卫红;

    [目的]研究氮源、氮源和矿质元素对菌株MY07产吲哚乙酸量的影响。[方法]在单因素筛选和初始浓度确定试验的基础上,利用响应面分析法对细菌MY07产吲哚乙酸的液体发酵培养基进行优化,采用Box-Benhnken设计和响应面法对碳源、氮源和矿质元素水平进行分析。[结果]结果表明,菌株MY07产IAA的液体发酵培养基最佳组合为:0.94%甘露醇,2.35%KNO3,0.12‰Mg SO4·7H2O,0.13‰Ca Cl2·2H2O,在此条件下的验证试验表明,IAA产量可达到28.16μg/ml。[结论]通过响应面法优化菌株培养基后,有利于提高该菌产生IAA的能力。

    2015年02期 v.25;No.147 201-204页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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