- 周静文;艾克特;徐佩;庹锐;杨代勤;许巧情;
[目的]干扰素调节因子(IRFs)-5,IRF-7在抗病毒免疫反应中发挥重要作用,研究黄鳝(Monopterus albus)干扰素调节因子的结构及表达有助于阐明黄鳝抗病毒的机理。[方法]通过PCR法扩增黄鳝IRF-5和IRF-7两个基因c DNA序列,分析其氨基酸序列,并利用荧光定量PCR技术研究黄鳝不同组织这两个基因的表达。[结果]已扩增到黄鳝IRF5 c DNA序列887bp,编码295aa;IRF7 c DNA序列1 181bp,编码378aa。荧光定量显示:IRF-5在脑中表达量很高,IRF5/β-actin高达120.3×10-2,而在主要免疫器官头肾、尾肾、肠和脾脏中这个比值仅分别为:0.17×10-2、0.11×10-2、0.69×10-2和0.60×10-2。IRF-7在皮肤中表达量很高,IRF7/β-actin比值达68.3×10-2。[结论]IRF-5可能在黄鳝神经系统中发挥重要作用,而IRF-7在黄鳝粘膜免疫中发挥重要作用。
2014年06期 v.24;No.145 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 1246K] - 王海娟;王利;
[目的]:克隆鳗弧菌flaE基因并分析其蛋白结构,为研究该蛋白的生物学功能及免疫原性奠定基础。[方法]通过PCR方法对鳗弧菌flaE基因进行扩增,利用生物学软件对其序列及蛋白质结构进行分析。[结果]所得flaE基因的大小为841bp,其开放阅读框长度为798 bp,编码262个氨基酸。蛋白分子质量为28 411.4,理论等电点p I为5.70,脂肪系数为81.60,不稳定系数为31.81;为疏水性蛋白;没有信号肽和跨膜螺旋结构;保守区结构域属于flagellin家族;二级结构中以α螺旋为主,其次是无规则卷曲和β片层,少量β转角;三级结构与3k8v.1.A的结构模型相似率为90%。[结论]成功克隆了鳗弧菌flaE基因,Gen Bank登录号为KM091934。
2014年06期 v.24;No.145 5-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 616K] - 梁秀怡;梁志成;刘雯莉;何洁凝;张智;田生礼;
[目的]构建以乳酸克鲁维酵母表达载体p KLAC2为基础的表达型T载体。[方法]利用定点突变技术突变载体p KLAC2上的XcmⅠ位点,获得表达载体p KL-MUT;PCR扩增含黄色荧光蛋白基因的XcmⅠ酶切盒,通过EcoRⅠ和XhoⅠ位点连接至表达载体p KL-MUT,构建成重组载体p KL-YFP,限制性内切酶XcmⅠ酶切后即产生T载体p KL-T。连接融合基因14-3-3-Zs G转化至乳酸克鲁维酵母GG799。[结果]利用该T载体可成功克隆外源基因14-3-3-Zs G并在乳酸克鲁维酵母中表达14-3-3-Zs G蛋白,荧光和Western blotting验证正确。[结论]乳酸克鲁维酵母表达型T载体已成功构建,具有快速克隆高效分泌表达外源基因的特点,对于促进乳酸克鲁维酵母表达系统表达相关蛋白的产业化具有实际意义。
2014年06期 v.24;No.145 9-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 553K] - 李尔汉;彭思露;李汉昕;徐艳红;王筱兰;朱笃;杨慧林;
[目的]实现解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶在大肠杆菌中的高效表达,建立有效的透析复性方法,获得有活性的重组淀粉酶。[方法]以解淀粉芽孢杆菌DSM 7基因组DNA为模板,PCR扩增获得无信号肽的α-淀粉酶结构基因,克隆至p ET-22b(+),转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况,采用透析法进行包涵体复性并检测酶活。[结果]成功表达重组蛋白,相对分子量约为54.8k Da,成功复性包涵体,复性效率为22.78%,重组α-淀粉酶酶活力为102.4 U/m L。[结论]实现了解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶在大肠杆菌中的高效表达,包涵体经透析法成功复性,获得具有催化活性的重组淀粉酶。
2014年06期 v.24;No.145 13-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 865K] - 李亚军;罗秋兰;费小雯;邓晓东;
[目的]克隆莱茵衣藻缺铁应答基因Femu2p,构建重组表达载体p GEX-6p-1-Femu2p,优化条件使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。[方法]提取莱茵衣藻CC425的总RNA后,利用RT-PCR和两次重叠延伸PCR相结合的方法获得Femu2p的全长编码区,构建原核表达载体p GEX-6p-1-Femu2p,并将其转入大肠杆菌DL21(DE3)中,利用IPTG诱导融合蛋白的表达并优化表达条件。[结果]Femu2p的全长编码区为2 904 bp,编码967个氨基酸,理论分子量为100.4 k Da,理论等电点为8.86。序列分析结果显示该蛋白属于包含多个C2H2类型锌指结构域的Ran BP2家族。IPTG诱导融合蛋白表达的最佳条件为:IPTG浓度0.25 mmol/L,诱导温度16℃,诱导时间8 h。[结论]成功克隆了Femu2p基因的全长编码区,并使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。
2014年06期 v.24;No.145 18-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 584K] - 赵淑玲;刘璐璐;薛亚男;郝佳慧;
[目的]利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)RNA聚合酶(RdRp)基因。[方法]RT-PCR扩增RdRp基因功能区片段,克隆于转移载体p Fast Bac HTb上,转化到大肠杆菌DH10Bac中,得到重组杆状病毒表达载体Bacmid-rp。提取Bacmid-rp DNA,转染Sf9细胞获得重组病毒v Ac-rp。将重组病毒v Ac-rp感染Sf9细胞使目的蛋白在细胞内表达,并利用亲和层析纯化,SDS-PAGE检测RdRp的表达情况。将纯化的RdRp蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot分析RdRp的免疫原性。[结果]RSV RdRp基因功能区能够在Sf9细胞中表达,蛋白分子量约为45k Da,与预测大小一致,且可与RdRp抗血清发生特异性反应。[结论]在真核细胞中成功表达了RSV RdRp,并得到了纯化的RdRp和其多克隆抗体。
2014年06期 v.24;No.145 23-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 345K] - 赵晶;李轶杰;罗晶晶;彭永玉;吕慧;刘东亮;孙素荣;
[目的]构建骆驼蓬脂转移蛋白(Ph LTP)原核表达载体,并研究表达产物的体外抗癌活性。[方法]采用RT-PCR法从骆驼蓬(Peganum harmala)叶中扩增Ph LTP基因,将其成熟肽片段克隆至p ET-30a载体上,构建表达载体p ET-30a-Ph LTP,将重组质粒转化E.coli BL21进行原核表达,通过镍柱纯化获得重组骆驼蓬脂转移蛋白(r Ph LTP),经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,用MTT法检测其体外抗癌活性。[结果]成功构建骆驼蓬脂转移蛋白c DNA表达载体p ET-30a-Ph LTP,其在E.coli中以可溶性融合蛋白形式表达,分子量约为18 k Da。经镍柱纯化后重组蛋白r Ph LTP能够显著抑制宫颈癌He La、黑色素瘤B16和食管癌Eca-109细胞的生长,IC50值分别为16.76±1.23、38.92±2.16和9.01±1.01μg/m L。[结论]克隆了骆驼蓬脂转移蛋白基因并在原核表达系统中成功表达,r Ph LTP所显示的显著抗癌活性预示其具有临床应用的潜能。
2014年06期 v.24;No.145 26-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 636K] - 程佳;杨祎琦;祁珊珊;魏夏媛;王永吉;
[目的]研究维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)在大鼠不同部位脂肪组织中的定位及基因表达量的差异。[方法]利用苏木精伊红染色(Haematoxylin and Eosin stain,H&E)和免疫荧光染色技术,分别对正常SD雌鼠和SD雄鼠的内脏、皮下和肾周的脂肪组织,进行形态学分析和VDR定位研究;同时提取各脂肪组织的RNA,利用RT-PCR技术定量分析大鼠各脂肪组织间VDR的表达差异。[结果]大鼠不同部位的脂肪组织在形态学上具有一定的差异;VDR主要集中分布在大鼠脂肪细胞的细胞核中;VDR基因在雌雄SD大鼠各个脂肪组织中的表达量不同,但差异不显著(P>0.05)。[结论]为脂肪细胞的分化以及VDR的功能研究奠定基础,为今后肥胖的发病与治疗提供理论依据。
2014年06期 v.24;No.145 31-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 478K] - 陈琦;李少伟;贾宇臣;孙虹;王利;
[目的]研究蓝莓花青素(BA)对人结肠癌Lovo细胞增殖及凋亡的影响,分析凋亡相关基因—p53基因mRNA和蛋白表达的变化。[方法]分别用浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的BA处理结肠癌Lovo细胞24h,采用MTT法、免疫荧光法和Real-time PCR法和免疫细胞组织化学分析BA对Lovo细胞增殖、细胞凋亡、p53 mRNA和蛋白表达的影响。[结果]BA呈剂量依赖的方式抑制Lovo细胞增殖;能诱导细胞发生晚期凋亡;与对照组相比,不同浓度BA处理后p53基因mRNA表达水平分别上调0.602、0.697、0.541倍(P<0.05),但BA不同剂量组间并无明显的差异(P>0.05);免疫细胞组化结果表明随着BA浓度的增加,p53表达增强。[结论]BA可以诱导结肠癌Lovo细胞发生晚期凋亡,p53基因mRNA表达上调,但与BA的浓度无相关性。
2014年06期 v.24;No.145 34-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 503K] - 陈佩林;陈峰;陈方敏;张千千;
[目的]为了研究CRBN基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型智力发育迟滞(ARNSMR)的关系。[方法]从293T细胞中克隆了CRBN和CRBN突变体基因(CRBNm),并克隆至pc DNA-GFP、pc DNA-Flag质粒中,将重组质粒用脂质体转染到293T细胞中,Co-IP与GFP-CRBN、CRBNm融合蛋白相互作用的293T细胞蛋白,通过PAGE胶电泳、银染分析差异蛋白。同时我们还做了CRBN和CRBNm蛋白稳定性和泛素化修饰研究。[结果]发现CRBN基因无义突变后没有改变蛋白的细胞定位,但影响了相互作用蛋白,同时突变的CRBN蛋白自我泛素化修饰增强,与野生型相比更容易降解。[结论]CRBN基因的无义突变后蛋白泛素化修饰增强,细胞内相互作用蛋白发生改变,从而影响了CRBN基因的功能。
2014年06期 v.24;No.145 38-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 501K]
- 李净净;纠敏;姜成英;汪伦记;王渡创;尤晓颜;
[目的]对喜温嗜酸硫杆菌和氧化亚铁嗜酸硫杆菌菌株的基因组数据进行比较分析和数据挖掘。[方法]采用Blast程序、MUMmer软件以及Artemis比对软件对4株嗜酸硫杆菌的基因组序列和蛋白质组序列进行同源比对分析以及可视化呈现,并通过RT-PCR对缺失基因进行验证。[结果]与喜温嗜酸硫杆菌相比,氧化亚铁嗜酸硫杆菌不含有鞭毛编码基因,并且含有较少的转座元件(26和41个);喜温嗜酸硫杆菌主要采用SOX系统(clusterⅠ和clusterⅡ)进行无机硫化合物的氧化;除硝酸盐还原外,氧化亚铁嗜酸硫杆菌还可以通过固氮酶(AFE1522-1515和Lferr_1240-1233)固定氮气获得氮源。此外,插入序列造成硫氧化还原酶基因的缺失以及7个功能基因失活等现象表明冶金微生物基因组存在不稳定性。[结论]比较基因组学为更好地挖掘嗜酸硫杆菌属物种的基因组数据信息、揭示其基因组结构特征以及冶金性状等差异提供了重要支持。
2014年06期 v.24;No.145 41-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 756K] - 陈心;叶全武;谢焕松;王军;苏永全;
[目的]通过分析PcQM蛋白质的结构,预测其高级结构和功能,为进一步研究PcQM蛋白提供理论依据。[方法]利用Blast P和相关分析蛋白质理化性质与结构的软件,对PcQM蛋白进行结构与功能预测分析。[结果]PcQM蛋白不存在N端信号肽,存在多个酶切位点,无跨膜结构,定位在细胞质中。不存在二硫键,该蛋白含26.05%α-螺旋结构(H),20.93%β-折叠结构(E),53.02%无规则卷曲(L)。最后,通过Swiss-Model程序预测了PcQM蛋白的三级结构。[结论]较全面地分析和预测了PcQM蛋白的理化性质、二级结构和三级结构等。为深入分析PcQM在大黄鱼(Larimichthys crocea)体内免疫调节功能研究,提供了理论依据。
2014年06期 v.24;No.145 47-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 909K] - 熊勇;赵春艳;杨青松;杨晓兰;
[目的]运用电子克隆的方法获得黄花蒿中rbc L基因,并对该基因进行生物信息学及适应性进化分析,获得氨基酸正选择位点及其空间结构特征。[方法]以短葶飞蓬rbc L基因为种子序列(探针,Genbank登录号为:KF482865.1),对黄花蒿的EST数据库进行搜索,应用相关的生物软件进行拼接、组装,利用PAML程序检测其rbc L基因的适应性进化。[结果]获得一个rbc L基因的c DNA序列重叠群,该重叠群长为1 832bp,包含一个完整的长为1 461bp的开放阅读框,共编码486个氨基酸,且与菊科的其他植物的rbc L基因具有较高的同源性,适应性进化分析在rbc L蛋白上有两个氨基酸正选择位点(249S和449T)。[结论]电子克隆获得的c DNA序列为完整的黄花蒿rbc L基因全长c DNA,黄花蒿对生境的适应可能与rbc L蛋白大亚基正选择位点空间结构有关。
2014年06期 v.24;No.145 50-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 1862K] - 韩长志;
[目的]希金斯炭疽菌可引起菜心、萝卜等十字花科植物的炭疽病,给经济产生巨大损失。目前,炭疽病菌对苯并咪唑类杀菌剂所产生的抗性问题引起了学者广泛关注,有待于开发新的作用靶标的化学药剂。腺苷酸环化酶(AC)在G蛋白信号传导途径上发挥着重要作用。[方法]基于酿酒酵母中Srv2序列,通过Blastp比对及关键词搜索,并利用SMART进行保守结构域分析,同时,通过对该菌中AC相关蛋白序列进行理化性质、信号肽、跨膜结构域等分析。[结果]明确该菌含有2个与Srv2同源的AC相关蛋白Cg Cap1、Cg Cap2,就理化性质、二级结构等特征方面而言,Cg Cap1、Cg Cap2与Srv2有着较大的差异。此外,通过对Srv2与Cg Cap1、Cg Cap2及其同源序列进行比对分析,发现Cg Cap1、Cg Cap2序列分别与其同源序列及Srv2的C端、N端具有较大的相似性,推测上述序列分别为希金斯炭疽菌AC的C端和N端。[结论]该研究为深入开展该菌AC的研究打下坚实的理论基础。
2014年06期 v.24;No.145 56-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 507K] - 胡翠英;郭伟强;臧帅;顾华杰;蒋伟娜;王桃云;
[目的]苍术酮是苍术的重要成分之一,研究显示其具有抗肿瘤作用,但其作用靶点目前尚不明确。本文利用Autodock模拟预测苍术酮的潜在抗肿瘤靶标。[方法]采用Autodock 4.0软件进行分子对接。[结果]模拟分析得出苍术酮与AKT、MMP-9、Bcl-xl等的结合较好,且苍术酮与他们的功能区域存在相互作用。[结论]AKT、MMP-9、Bcl-xl可能是苍术酮的潜在抗肿瘤靶点。本文丰富了苍术酮的抗肿瘤机理,也为以苍术酮为先导化合物,开发新型靶向抗肿瘤药物提供理论基础和技术支持。
2014年06期 v.24;No.145 60-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 800K] - 颜冬菁;陈正望;
[目的]研究过表达Daintain对巨噬细胞RAW264.7增殖和吞饮功能的影响。[方法]培养RAW264.7细胞,脂质体法导入过表达Daintain的质粒(pc DNA-DT)和空质粒(pc DNA),经G418筛选单克隆细胞株。Western Blot检测稳定转染细胞株中Daintain的表达,MTT法检测Daintain过表达对RAW264.7细胞增殖的影响,中性红染色法检测Daintian过表达对LPS诱导的RAW264.7细胞吞饮功能的影响。[结果]1对比转染pc DNA质粒的细胞株,转染pc DNA-DT质粒的细胞株中Daintian表达量增加28.7%,说明成功建立稳定过表达Daintian的RAW264.7细胞株;2在48h和72h,相对转染pc DNA的细胞株,转染pc DNA-DT的细胞株增殖明显增强;3在0.1和1μg/m L LPS诱导下,相对转染pc DNA的细胞株,转染pc DNA-DT的细胞株的吞饮作用增强。[结论]过表达Daintain促进RAW264.7细胞增殖和吞饮功能。
2014年06期 v.24;No.145 63-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 414K] - 李莎;刘宇;马康;马元伟;李明;许峰;
[目的]建立白灵菇退化菌种的检测方法。[方法]退化的白灵菇白10菌株和提纯复壮的自交45×49菌株为试验材料,分别采用YBLB试剂、LBL液体摇瓶培养和悬浮液脱色培养基以提纯复壮的菌株为对照,对退化的菌株进行鉴别。[结果]YBLB、LBL两种方法中正常菌株均能使试剂或培养基脱色,退化菌株则不能,从而可定性区分出正常菌株与退化菌株,悬浮液脱色培养基方法定量测定了脱色培养基中的脱色率,退化菌株白10的脱色率仅为54.7%,而正常菌株脱色率高达95.44%。[结论]成功地建立了白灵菇退化菌种定性及定量的快速鉴别方法,退化菌株的脱色率D<60。
2014年06期 v.24;No.145 66-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 463K]
- 刘祥;陈春琳;牟欢;吴三桥;张涛;张晓娟;
[目的]构建人骨硬化蛋白(Sclerostin,SOST)原核载体,表达、纯化SOST蛋白,制备与鉴定小鼠多克隆抗体。[方法]通过分子克隆获得SOST蛋白的表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得SOST蛋白,免疫小鼠制备SOST蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度;Western blotting检测抗血清特异性;DNAMAN与MEGA软件分析SOST蛋白系统进化关系。[结果]SOST重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致。ELISA法获得SOST抗血清滴度达1:6 400倍,Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。SOST序列的系统发生分析发现动物具有显著不同的进化趋势。[结论]成功克隆、表达与纯化SOST蛋白,制备并鉴定小鼠多克隆抗体。为SOST蛋白功能研究奠定基础。
2014年06期 v.24;No.145 68-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 1216K] - 郭琼;沙亚哈提·别尔克哈之;李惠武;
[目的]检测MYC、PTEN、TP53在哈萨克族食管癌组织和远端无癌组织的表达,分析与临床病理因素的关系,探讨它们在哈萨克族食管癌发生发展中可能存在的关系。[方法]Trizol一步法获取组织标本总RNA,逆转录为c DNA,运用半定量RT-PCR技术检测食管癌组织、远端无癌组织中三个基因mRNA表达量及阳性表达率。[结果]1 MYC mRNA表达量在食管癌组织中高于远端无癌组织(P<0.01);PTEN、TP53 mRNA表达量在远端无癌组织中高于癌组织(P<0.01,P<0.05);2 MYC阳性表达率在食管癌组织中高于远端无癌组织(P<0.01);PTEN、TP53阳性表达率在远端无癌组织中高于癌组织(P<0.01,P<0.05));3MYC表达与分化程度(P<0.05)、TNM分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)和侵犯深度(P<0.05)有关;PTEN表达与分化程度有关(P<0.05);TP53的表达与上述指标无关;4 MYC和PTEN、TP53表达呈负相关(r=-0.494;r=-0.428);PTEN、TP53表达呈正相关(r=0.531)。[结论]哈萨克族食管癌组织中MYC表达上调,PTEN、TP53低表达或不表达。上述结果说明MYC参与哈萨克族食管癌的发生和发展,PTEN、TP53则是阻止食管组织发生癌变的保护性基因。
2014年06期 v.24;No.145 73-76页 [查看摘要][在线阅读][下载 440K] - 赵红霞;孙九丽;苟萍;
[目的]明确灰葡萄孢菌AUR1基因(Bc AUR1)对灰葡萄孢菌细胞生长、发育和繁殖的作用。[方法]采用PCR扩增Bc AUR1的P和T片段,依次克隆于p TFCM质粒载体的潮霉素基因两侧,构建灰葡萄孢菌AUR1断裂基因表达载体,通过农杆菌介导转化灰葡萄孢菌,在潮霉素抗性培养基上筛选转化子。Ab A处理灰葡萄孢菌,观察细胞形态。[结果]断裂基因转化子比空载转化子显著减少,说明Bc AUR1断裂基因同源重组替代了宿主AUR1基因,导致转化子不能存活。Ab A显著影响野生型灰葡萄孢菌的生长发育,导致孢子萌发延迟、菌丝形态异常,不能形成分生孢子头;但Ab A不影响抗Ab A突变体Bc AUR1a的生长发育。[结论]AUR1基因对灰葡萄孢菌生长、发育和繁殖起重要作用。
2014年06期 v.24;No.145 76-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 1047K] - 关晓侠;陈斯睿;殷玉和;李玲玲;陈吉;吴丛梅;
[目的]通过噬菌体的肽库筛选并合成具有抑制ICL活性的多肽。[方法]以ICL为基础,利用Discovery Studio 2.1中ligentfit模块,将筛选出多肽与优化后ICL进行分子对接。合成并进行生物活性检测。[结果]通过噬菌体肽库筛选得到6条的七肽成功和ICL对接。合成后的6条七肽质谱检测结果均正确。对6条七肽进行体外生物活性检测,对ICL酶的活性均明显具有抑制的作用。其中3条七肽抑制率超过了70%。[结论]利用虚拟筛选优化了ICL抑制剂的筛选过程,筛选并合成ICL抑制剂,抑制率为75%、64%、66%、77%、78%、67%,为抗结核多肽药物研发提供基础。
2014年06期 v.24;No.145 82-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 1080K] - 曹薇薇;刘伟;高原;王维山;史晨辉;陈昭;何建伟;
[目的]观察生理状态下人骨肉瘤细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPKs)被磷酸化的过程。[方法]先进行ECFP-p38MAPK-Citrine(p38MAPK biosensor)融合蛋白表达载体的构建及鉴定,然后转染MG-63细胞24h后观察转染效率和融合蛋白表达情况。在荧光显微镜下,应用Meta Flour FRET 4.6软件测量转化生长因子-β1刺激MG-63细胞前后p38MAPK biosensor的荧光能量共振转移的变化情况。[结果]p38MAPK biosensor转染效率达30%~40%,均匀分布在胞质和胞核中。转化生长因子-β1刺激MG-63细胞后,胞质和胞核内荧光能量共振转移比值(Citrine/CFP)迅速增高,历时约30min达到最大值。特异性p38MAPK抑制剂SB-203580与细胞共孵育后,FRET比值逐渐减小。[结论]应用荧光能量共振转移技术使我们在活细胞生理状态下,实时动态监测p38MAPK被磷酸化的时空信息。
2014年06期 v.24;No.145 86-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 656K] - 张锐;
[目的]研究厌氧氨氧化耦合异养反硝化脱氮系统中的微生物群落。[方法]采用聚合酶链式反应、克隆等分子生物学方法,通过构建16S rDNA克隆文库,进行同源性分析和系统发育树构建。[结果]从克隆文库中随机挑选的100个克隆子中有79个阳性克隆子,共分为17个操作单元,该基因文库的多样性覆盖率为87%,Shannon–Weiner指数为3.89,Simpson指数为0.92。经过比对发现这些微生物主要被划分为三个门类:变形菌门、拟杆菌门和绿菌门。其中变形菌纲所占比例为76.5%,包括α-proteobacteria、β-proteobacteria和γ-proteobacteria,拟杆菌门和绿菌门细菌所占比例分别为17.6%和5.9%。[结论]反应器内细菌多样性较丰富,包括变形菌门、拟杆菌们和绿菌门细菌,其中变形杆菌在该脱氮系统中是最主要的菌群。另外,反应器内可能存在部分未知细菌,有待进一步研究。
2014年06期 v.24;No.145 91-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 770K] - 谷军;张晓彦;沙长青;
[目的]在淡紫拟青霉固体发酵生产过程中,提高淡紫拟青霉分生孢子产量。[方法]通过研究筛选发酵原料和优化固体发酵培养基,控制发酵工艺条件等方法,提高了固体发酵淡紫拟青霉的分生孢子产量。[结果]通过研究固体发酵过程,得出玉米粉作用显著,能显著提高固体发酵淡紫拟青霉的分生孢子数,可达到1.31×1010CFU/g。[结论]该淡紫拟青霉的最优培养基为:麸皮72.5%、玉米粉15%、豆饼粉10%、稻壳2%、硫酸铵0.5%。生产工艺为原料与水的比例为1:0.6,发酵温度为26℃,发酵培养时间为8d。
2014年06期 v.24;No.145 94-98页 [查看摘要][在线阅读][下载 794K]