- 于永生;罗晓彤;李娜;张树敏;
目的:构建针对猪肌肉生长抑制素mRNA的RNA干涉载体,并体内验证其有效性。方法:分别体外转染化学合成4个19 bp的siRNA片段获取针对肌肉生长抑制素的序列,构建RNA干涉载体,将上述载体注射到猪股四头肌中,RT-PCR检测证明其表达有效性及生肌调节因子mRNA水平的变化。结果:获得了针对肌肉生长抑制素的2个小干涉RNA序列,构建了2个重组载体,股四头肌注射混合后的等量重组载体,RT-PCR显示注射重组RNA干涉载体可显著降低肌肉生长抑制素的mRNA水平(约降低了40%),生肌调节因子mRNA水平显著上调(分别约为对照组的2.1～3.9倍)。结论:该试验为在转基因动物的肌肉中表达外源基因奠定了基础。
2012年05期 v.22;No.132 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 666K] - 邱贤秀;周莹;王雪琦;丁伟超;刘忠;王绍祥;王一飞;
目的:克隆出人Aurora B基因,并将其于大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中表达,获得重组蛋白。方法:利用TRIzol Reagent法提取食管癌ECa 109细胞总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增Aurora B基因,构建pET 28a(+)-Aurora B重组质粒,将其转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG体外诱导表达重组蛋白。利用生物信息学工具对Aurora B的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果:成功构建了pET 28a(+)-Aurora B重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人Aurora B基因序列同源性达到了99%;获得Aurora B蛋白,大小约39kDa,蛋白表达量约占菌体总蛋白的28%。结论:对人Aurora B基因进行克隆、原核表达及生物信息学分析,为深入研究Aurora B在细胞周期调控中的作用机制及后续Aurora B抑制剂的体外筛选奠定基础。
2012年05期 v.22;No.132 5-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 722K] - 肖祥;李大荣;梁剑光;赫卫清;
目的:通过构建重组质粒,异源表达4″-异戊酰基转移酶基因(4″-isovaleyltrasferase gene,ist)生产螺旋霉素。方法:在螺旋霉素的4″位加上异戊酰基侧链从而获得基因药物必特螺旋霉素基因。结果:研究表明acyB2基因是ist的正调控基因,ist基因与acyB2基因构建的ist-acyB2共表达质粒不能在变铅青链霉菌TK24中表达。启动区点突变的回复表明770bp到780bp之间有一碱基由原来的A回复成G。结论:经测序研究后发现在ist的启动区产生了一个点突变,拟回复此突变之后重新构建新的ist-acyB2载体,可用于检测ist基因在异源宿主中的表达情况。
2012年05期 v.22;No.132 10-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 584K] - 周广舟;景红娟;卢延克;徐苏丽;伊艳杰;陈小兵;
目的:为深入研究细胞自噬的发生过程及机制,克隆人微管相关蛋白1轻链3-β(microtubule associated protein 1 lightchain 3,MAP1LC3,简称LC3)基因,并构建原核和真核重组质粒用于后续的研究。方法:首先RT-PCR方法从人食管癌9706细胞基因组中克隆LC3基因,并分别连接到pET-32a载体和pEGFP-N3载体上,形成重组质粒。前者用IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达,后者进行细胞转染实验。结果:IPTG诱导原核重组质粒在E.coli内实现表达,pEGFP-N3-LC3转染到A549人肺癌细胞36h和鲤鱼上皮瘤细胞系(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC)后,均检测到明显的绿色荧光信号,且在细胞质和胞核内均有分布。结论:成功构建了人源LC3重组表达载体,为研究高等和低等脊椎动物细胞自噬机制及机理过程提供了很好的研究工具。
2012年05期 v.22;No.132 13-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 624K] - 张香春;冯磊;张鑫;何潇涵;吴子环;高凤山;
目的:构建荷包猪SLA-2重链基因偶合底物肽(BSP)并研究其在pET-21a(+)中的蛋白表达。方法:设计荷包猪SLA-2-BSP复合基因引物,PCR扩增荷包猪SLA-2-HB-BSP复合基因,并克隆至pMD19-T Simple Vector,经酶切鉴定后,将SLA-2-HB-BSP复合基因与表达系统pET-21a(+)连接,并转化BL21(Rosetta)菌进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。结果:PCR结果显示,SLA-2-BSP大小为900bp左右,并成功克隆至pMD19-T Simple Vector载体,酶切后大小为876bp,该基因连接pET-21 a(+)并转化宿主菌BL21(Rosetta)后,经诱导表达和SDS-PAGE检测,目标蛋白大小为34.4kDa,经优化后目的蛋白相对表达含量达到了45%。结论:该研究成功构建荷包猪SLA-2偶合BSP的pET-21a重组表达系,为下一步构建猪SLAⅠ类分子四聚体奠定了基础。
2012年05期 v.22;No.132 17-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K] - 李蕊;陈创夫;盛金良;张辉;杨霞;黄林;刘志方;王讲德;监通;李天森;
目的:构建GM-CSF原核表达载体,并诱导表达、纯化其蛋白。方法:将GM-CSF基因克隆至原核表达载体pET-32中,转化至BL21中,用智能蛋白质多维纯化系统(AKTAxpressTM)纯化目的蛋白,利用MTT法测定GM-CSF融合蛋白对绵羊外周血淋巴细胞的增殖活性。结果:成功获得了435bp的绵羊GM-CSF基因片段,诱导表达了35kDa融合蛋白GM-CSF,其纯度达95%以上,浓度达860mg/mL;通过MTT证明该融合蛋白对绵羊淋巴细胞具有增殖活性,其作用最明显的蛋白浓度是200μg/mL。结论:成功获得重组蛋白GM-CSF,该蛋白具有较好的生物活性,为免疫增强佐剂的开发奠定了基础。
2012年05期 v.22;No.132 20-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 934K] - 李国辉;王鹏;唐琦;胡朝阳;黄国平;
目的:对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)囊膜蛋白P74膜外肽段与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CotC与进行融合表达,制备表面展示有P74蛋白的重组芽孢,为深入研究该重组芽孢的功能提供基础。方法:将CotC基因与BmNPV P74膜外编码序列进行融合,构建表达CotC-P74融合蛋白的重组质粒pJS700-p74。通过双交换使该重组质粒中的CotC-P74表达盒整合到枯草芽胞杆菌染色体淀粉酶基因位点,并对发生同源重组后的菌株进行筛选和PCR鉴定。结果:PCR结果表明CotC-P74成功地整合到枯草芽孢杆菌基因组上,通过作者实验室制备的P74多抗对诱导后的重组芽孢衣壳总蛋白进行Western blot分析,结果在49 kDa位置处能杂交到一条特异的蛋白带。结论:P74蛋白胞外肽段成功地展示在枯草芽胞杆菌芽胞表面。
2012年05期 v.22;No.132 25-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 535K] - 袁跃;胡晶;王友如;
目的:在大肠杆菌中高效表达重组Pfu酶。方法:将pfu基因构建于载体pET28a上,重组质粒pET28a-pfu转化DH5α,获得了含pET28a-pfu重组表达菌株。在重组菌株OD600为0.2时,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达10～12 h后,菌体超声波破壁后,80℃条件下热变性30 min去除部分杂蛋白;粗酶液再经Ni离子亲和层析进一步纯化。结果:获得了高纯度的重组Pfu酶,利用该酶成功扩增出目的基因片段。结论:纯化的Pfu酶具有较高的活性,比活性为62 500 U/mg,该研究表达的重组酶完全可以替代商用Pfu酶。
2012年05期 v.22;No.132 29-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 362K] - 沈娟;丁静;金小宝;卢雪梅;朱家勇;
目的:为开发一种多功能蛋白分子,该文采用生物信息学方法对LL-37-haFGF融合蛋白进行结构预测与分析。方法:重叠PCR技术克隆LL-37-haFGF基因,运用生物信息学软件分析LL-37-haFGF编码蛋白序列和结构。结果:LL-37-haFGF融合基因编码215个氨基酸,分子量为23.8 kDa,理论等电点为8.86,利于基因工程表达,结构分析表明其结构有利于多功能活性的保持。结论:融合基因的生物信息学分析与结构预测为研究其活性和作用机制奠定了基础。
2012年05期 v.22;No.132 31-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 813K]
- 王鹏;热依汗古丽·阿里木;刘忠渊;
目的:昆虫总RNA由于其自身结构特点,存在与动物植物完全不同的电泳条带,本文通过对比探索光滑鳖甲总RNA提取的最优方案。方法:实验采用5龄光滑鳖甲幼虫,利用TRIzol、CTAB、热酚法、及BioTeKe Kit、TianGen Kit试剂盒提取方法提取光滑鳖甲总RNA。结果:(1)所采用的实验方法提取的光滑鳖甲总RNA均呈现出与植物、哺乳动物血细胞、哺乳动物组织样总RNA不同的条带,28S弱于18S条带亮度;(2)TRIzol法、CTAB法、改进热酚法所得光滑鳖甲总RNA条带清晰、完整,D260/D280值为1.89～1.98,D260/D230值为1.94～2.09,纯度较好;(3)TRIzol法RNA提取得率为304.3～365.4μg/g,BioTeKe Kit RNA提取得率为73.38～128.22μg/g。结论:综合所有参数,所选取的方法中,TRIzol法可获得高质量、高产量的光滑鳖甲总RNA,可用于RT-PCR、文库构建等高要求RNA的提取。
2012年05期 v.22;No.132 36-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 498K] - 董红霞;钟兰;王芸;黄新芳;孙亚林;刘玉平;刘义满;柯卫东;
目的:获得清晰可靠、重复性较好的ISSR-PCR扩增反应体系,应用于芋种质资源进行遗传多样性的研究中。方法:以芋的幼叶提取基因组DNA为材料,采用正交试验设计L16(45),从模板DNA浓度、引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度及TaqDNA聚合酶的用量5因素4水平出发,构建芋最佳反应体系。结果:芋ISSR-PCR的最佳反应体系为:在25μl的反应体系中,40ng DNA模板、0.4μmol/L引物浓度、2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、1 U Taq DNA聚合酶。结论:利用芋种质资源对最佳反应体系的验证,结果显示该反应体系具有扩增稳定性。
2012年05期 v.22;No.132 40-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K] - 杜志强;王建英;
目的:研究布鲁氏菌Omp31分子的免疫原性。方法:利用IPTG诱导rOmp3148-74-BLS融合重组蛋白表达,经过His-tag镍柱进行亲和纯化之后,作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。结果:rOmp3148-74-BLS重组蛋白能够被大肠杆菌正确表达,而且,能够作为有效的抗原刺激家兔产生可以相互识别的多克隆抗体。结论:Omp31分子具有较好的免疫原性,可以引起较强的免疫反应。
2012年05期 v.22;No.132 43-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 371K] - 熊勇;杜荣花;马金林;
目的:采用ISSR标记构建云南省栽培灯盏花DNA指纹图谱并进行遗传多样性分析。方法:从20对候选引物中筛选出7对引物对云南10个地方栽培灯盏花进行扩增,通过扩增带型的差异构建其DNA指纹图谱,利用Popgen32、NTSYS2软件进行遗传一致性系数和遗传多样分析。结果:7对引物在10份共扩增出48条谱带,其中33条具有多态性,占68.8%,表明各居群的遗传差异较大。10个地方种质资源被聚为2个大类,野生居群被聚为一类,栽培灯盏花聚为一类,其中栽培灯盏花有两大亚类。结论:通过构建DNA指纹图谱容易地把灯盏花种植资源相互区分鉴别出来,10个地方灯盏花种质资源遗传多样性丰富,栽培灯盏花与野生具有差异,栽培种质材料之间也有差异。
2012年05期 v.22;No.132 45-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K] - 王德信;
目的:选取天麻3种变型,测定ITS-1序列并进行对比分析,找出变异信息位点,对不同变异类型亲缘关系作出判定。方法:采用改良的CTAB法提取DNA,利用合成的特异引物对ITS区进行扩增,并对目的片段测序分析。结果:ITS-1共计209bp,序列片段上有27个单核苷酸变异位点,ITS-1单核苷酸多态性以碱基转换为主,绿天麻最高达80.8%,乌天麻最低也达70%;黄天麻居中达71.4%。在多态性位点数及多态性频率上,绿天麻均表现为最高分别为26、8.04;黄天麻表现居中为21、9.95;乌天麻表现最低为20、10.45。结论:乌天麻是古老类型,绿天麻是较为进化的类型,黄、绿天麻是由乌天麻进化而来。
2012年05期 v.22;No.132 48-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 483K] - 任凌雁;何燕;王婵娟;张婷;王欢;李毅;官志忠;单可人;
目的:研究贵州省6个世居少数民族线粒体9bp序列缺失情况。方法:采用PCR法及聚丙烯酰胺凝胶技术检测线粒体基因组色素氧化酶Ⅱ和tRNAlys基因间非编码序列中含9bp序列缺失情况。结果:在研究的6个少数民族中只发现标准型和缺失性2种多态性,仡佬族、仫佬族、畲族、毛南族、羌族、蒙古族线粒体DNA 9bp缺失频率依次为:26.9%、17.3%、23.1%、11.5%、7.7%、9.6%。结论:贵州省这6个世居少数民族线粒体9bp序列缺失频率较高,各民族的缺失频率有一定差异。
2012年05期 v.22;No.132 51-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 578K] - 吴芸;杨永强;蒋自立;陈瑶;
目的:试验旨在对务川黑牛SOCS1基因进行SNPs筛查。方法:选取务川黑牛为试验对象构建DNA池,设计2对引物分别扩增SOCS1基因的编码区和3'-UTR序列。切胶回收后对PCR产物进行双向测序。结果:结果表明,在牛中发现SOCS1基因SNPs位点。结论:SOCS1基因的编码区有1个SNPs,C645T为同义突变;3'-非翻译区(3'untranslated region,3'-UTR)有C815A和C900T 2个SNPs,3个SNPs等位基因频率分别为0.893 7、0.658 5和0.867 9。研究结果为下一步遗传效应分析及SOCS1基因对牛生长调控的功能研究提供一定试验基础。
2012年05期 v.22;No.132 54-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 448K] - 杨永强;焦仁刚;龚俞;惠嫣婷;刘若余;
目的:旨在对不同牛种STAM1基因进行SNPs筛查,为地方牛种选种选育提供一定理论依据。方法:选取生长发育性状明显差异的务川黑牛和贵州荷斯坦奶牛2个牛种构建DNA池,设计1对引物分别扩增2个牛种STAM1基因第14外显子序列总长898bp。切胶回收后对PCR产物进行双向测序。结果:在牛STAM1基因中快速筛查到5个SNPs:A33C、C66G、C356T、T523A、T652C,其中A33C(Tyr→Ser)、C66G(Pro→Arg)、C356T(Glu→Lys)为错义突变,T523A为同义突变,T652C位于内含子区。贵州荷斯坦奶牛在T523A和T652C两个位点基因频率为1.000 0,而务川黑牛分别为0.673 0和0.810 6。生物信息学分析表明:突变前后STAM1的RNA二级结构和蛋白质二级、三级结构均有明显改变。结论:DNA池结合测序技术可快速筛选SNP位点,检测到STAM1基因第14外显子5个SNPs。
2012年05期 v.22;No.132 57-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 466K] - 宋培勇;兰琴英;鲁卓越;
目的:了解南方红豆杉内生细菌类群及其系统发育关系;方法:对分离菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定,并做系统发育分析。结果:从南方红豆杉茎、皮和叶中共分离到内生细菌52株。对12株内生细菌16S rDNA进行PCR扩增,扩增产物大小约为1 400 bp,对11株内生细菌16S rDNA测序结果,用BLAST软件进行相似性比对,发现TB02株为Enterobacter属,相似性99%;9株为Bacillus属,相似性99%～100%;TB13株为Lysinibacillus,相似性97%。通过构建系统发育树发现这11株内生细菌明显聚为两大支。结论:11株内生细菌分别鉴定为肠杆菌、芽孢杆菌和Lysinibacillus,芽孢杆菌为南方红豆杉内生细菌优势菌属。芽孢杆菌和Lysinibacillus亲缘关系较近,二者和肠杆菌之间亲缘关系较远。
2012年05期 v.22;No.132 61-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 551K]
- 杨庆丽;刘宇峰;姬妍茹;董艳;高媛;
目的:构建苯酚降解工程菌Bacillus Subtilis dqly-2。方法:选取2株苯酚降解菌,分别为铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa zl1f4和枯草芽孢杆菌Bacillus Subtilis BHf3-4,体外扩增Pseudomonas aeruginosa zl1f4的邻苯二酚2,3双加氧酶基因(SYJ),并将此基因转入Bacillus Subtilis BHf3-4中,构建基因工程菌,并对野生菌和工程菌降解能力进行比较。结果:作用96h后,工程菌苯酚降解率为96.18%,显著高于野生菌的84.78%。结论:成功构建高效苯酚降解基因工程菌。
2012年05期 v.22;No.132 65-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 522K] - 殷霙;朱道立;陈佩林;王康乐;
目的:探讨黄芪注射液对H2O2损伤L6大鼠成肌细胞的修复。方法:取1、0.5、0.1、0.05mmol/L H2O2损伤成肌细胞建立模型,再取2 000、1 000、500、250、125、62.5mg/mL黄芪注射液实施保护。应用MTT法、流式细胞仪及荧光抗体Bax和Bcl-2检测,使用SPSS 15.0统计软件处理数据。结果:经0.1mmol/L H2O2损伤成肌细胞存活率由94.4±5.7%降至32.6±3.8%,凋亡率由0增至32.45±2.9%。黄芪注射液处理实验组细胞存活率64.5±4.8～82.2±9.6%较模型组32.6±3.8%增加,凋亡率也从32.45±2.9%减至2.96±0.5～9.29±2.7%,荧光抗体检测Bcl-2细胞数57.7±4.3～74.2±6.9,Bax细胞数42.3±4.0～60.2±5.1。结论:黄芪注射液对大鼠成肌细胞H2O2损伤经由p38MAPK信号通路实施保护。
2012年05期 v.22;No.132 68-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 2059K] - 李学军;都兴范;王林美;李亚洁;米锐;孟楠;温志新;李树英;
目的:优化从蛹虫草中提取、纯化虫草素的方法并鉴定其纯度。方法和结果:通过3种提取方法的比较,确定了以恒温水浴法作为虫草素规模化提取方法,最佳提取条件为45℃、80%乙醇;同时,确定了ML-7大孔树脂纯化虫草素的工艺,采用该工艺虫草素纯度可达到92%以上,并对纯化虫草素和标准品进行了比较鉴定。结论:该方法提取、纯化的虫草素纯度高,适于虫草素的规模化生产。
2012年05期 v.22;No.132 75-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 904K] - 陆步诗;李新社;范平;
目的:探索以黄曲霉和皮状丝孢酵母为菌种二步发酵大曲丢糟生产微生物油脂的最佳工艺条件。方法:利用黄曲霉对丢糟进行一步发酵,再以一步丢糟发酵物为基质,设定皮状丝孢酵母的接种量、培养温度、培养时间为三个因素,进行L9(33)正交试验。结果:黄曲霉一步发酵丢糟的最佳条件为接种量12%,在28℃下发酵5d,获得的一步丢糟发酵物还原糖含量为2.4051%;皮状丝孢酵母二步发酵丢糟生产微生物油脂的最佳条件为皮状丝孢酵母接种量12%,在30℃下培养4d,每1 000g发酵物中可得油脂19.32g。结论:利用黄曲霉的产纤维素酶的性能和皮状丝孢酵母积累油脂的性能进行二步发酵丢糟生产微生物油脂,具有一定的可行性。
2012年05期 v.22;No.132 79-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K]
- 隗黎丽;
实时荧光定量PCR技术是一种新的核酸定量技术,通过检测PCR产物中荧光信号强度达到定量的目的,与常规PCR相比,具有无污染、特异性强、检测灵敏、定量准确等特点,该技术在分子诊断、动植物检疫等方面得到了广泛的应用。目前水产养殖业处于飞速发展时期,其中鱼类的病害问题也日益突出,为了预防和控制鱼类病害,实时荧光定量PCR技术已逐渐应用于鱼类病害的研究中。该文将从实时荧光定量PCR的技术原理、主要类型以及实时荧光定量PCR技术在鱼类病害研究的应用研究作一综述。
2012年05期 v.22;No.132 82-85页 [查看摘要][在线阅读][下载 395K] - 孙加梅;王雪梅;王东建;杨延兵;段丽丽;李华;张晗;
谷子是一种重要的杂粮作物。谷子是二倍体自花授粉作物,基因组较小,与水稻基因组存在明显的共线性,是开展基因组研究的理想模式植物。SSR标记具有共显性、多态性高、操作简单等优点,广泛应用于遗传多样性研究、品种鉴定、遗传图谱构建、功能基因研究、分子标记辅助选择育种等领域。本文对谷子SSR标记的开发和应用进行总结,提出了谷子分子遗传研究中存在的问题,并对今后的发展趋势作了初步探讨,旨在为谷子分子遗传研究提供参考。
2012年05期 v.22;No.132 86-89页 [查看摘要][在线阅读][下载 391K] - 仙笑笑;范晓军;赵秋勇;
昆虫几丁质酶及类似蛋白由多种不同的基因编码而成,它们在分子量大小、空间结构、化学性质和酶学性质等方面存在较大的差异,并在昆虫不同的组织、不同时期的表达量各不相同,对昆虫生长发育过程中几丁质的代谢起着重要的作用。在昆虫几丁质酶的研究过程中,生物信息学在几丁质酶基因克隆、结构分析、同源性比较等方面应用广泛。该文主要对昆虫几丁质酶及生物信息学在昆虫几丁质酶研究中的应用、存在的问题及展望做了全面的综述。
2012年05期 v.22;No.132 89-93页 [查看摘要][在线阅读][下载 413K] - 吴红艳;汪付兵;
抗肿瘤治疗发展迅速,但仍然存在许多问题,例如早期诊断困难及化疗的副反应。为解决这些问题,适配子、包括单链DNA或RNA寡核苷酸受到越来越多的关注。适配子具有高度选择性、亲和力及稳定性。通过指数富集细胞配体系统进化技术(cell-SELEX)筛选到的寡核苷酸在识别病变细胞方面具有很大优势,因此,它具有应用于诊断和治疗的巨大潜力。该文综述了适配子在生物标记物的发现、肿瘤细胞富集和检测、靶向肿瘤治疗中的作用。
2012年05期 v.22;No.132 93-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 398K] 下载本期数据