- 杜长青;初金鑫;赵春玲;刘顺梅;
目的:克隆斑马鱼TK1基因的cDNA序列,并在大肠杆菌中诱导表达,对其产物进行生物学活性鉴定。方法:采用RT-PCR和RACE方法,克隆TK1的cDNA全长序列。表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达蛋白利用镍离子柱纯化。结果:获得TK1基因的cDNA全长序列,编码一个分子量为26kD的蛋白。结论:TK1融合蛋白在28℃条件表现出比较高的生物学活性,达到0.45 U/mg。
2012年02期 v.22;No.129 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 212K] - 黄巍;李小鸥;周丽荣;黄晓刚;刘桥;
目的:构建ADAM10真核表达载体,为进一步研究其生物学功能打基础。方法:将人ADAM10的上下两部分基因片段(分别为全长基因的1～910bp和911～2 247bp片段),依次与真核表达载体pcDNA3.1相连,以大肠杆菌DH5α或BL21(DE3)作为感受态宿主菌用于转化连接产物,拼接成全长的阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定。结果:ADAM10下段基因与已正确连入上段的pcDNA3.1重组质粒拼接时,若用DH5α为感受态菌,则下半段出现碱基插入增加512bp,测序结果显示为ADAM10基因第1 531 bp～2 042 bp间的序列有紧邻的双份;若用BL21(DE3)为感受态,则无突变。结论:将ADAM10基因与pcDNA3.1真核表达载体依次拼接构建重组质粒时,以DH5α为宿主菌可出现基因序列增加的罕见突变,而以BL21(DE3)为宿主则无突变,由此成功构建ADAM10全长基因与pcDNA3.1的重组质粒。
2012年02期 v.22;No.129 4-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1168K] - 孟仁;陈创夫;张辉;王远志;郭飞;鲁芝子;李瑞芳;
目的:构建布鲁氏菌2308株ery基因启动子缺失株。方法:用PCR方法从亲本株2308上扩增ery基因启动子侧翼序列,将该片段与pMD19-T连接,亚克隆为自杀载体pGEM-7zf-Δery-sacB。将自杀载体电转化布鲁氏菌感受态细胞中经同源重组后,分别用100 mg/L氨苄和7%蔗糖筛选。对获得的基因缺失株进行RT-PCR鉴定和遗传稳定性检测。结果:成功获得ery基因启动子缺失株,2308Δery基因启动子缺失株未扩增出eryA基因。并且该缺失株在10代以内未发生回复突变。结论:成功构建2308Δery基因启动子缺失株,为研究布鲁氏菌的毒力基因及其流产机制奠定基础。
2012年02期 v.22;No.129 9-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 453K] - 杜志强;任学敏;
目的:抗菌肽分子在无脊椎动物的先天免疫系统中,发挥着重要的抗菌作用;为了不断完善无脊椎动物先天免疫系统的抗菌机制,作者以凡纳对虾的对虾素基因作为研究对象,进行分子生物学方面研究。方法:以凡纳对虾的对虾素基因———penaeidin 4抗菌肽基因(Lva-pen 4)作为研究对象,主要进行了基因克隆、氨基酸序列比对、系统进化关系分析以及分子结构初步预测等研究内容。结果:Lva-pen 4的cDNA序列全长624bp,开放阅读框包括204bp,演绎67个氨基酸残基;在Lva-pen 4分子一级结构的氨基酸序列中,存在一个对虾素结构域,其中包括8个保守存在的半胱氨酸残基和6个脯氨酸残基。结论:根据分子结构的分析结果,推测Lva-pen 4是一个重要的免疫反应相关基因,在先天免疫系统中发挥着重要作用。
2012年02期 v.22;No.129 13-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 605K] - 王晖;胡雪峰;林政;
目的:制备接头蛋白NRBP的兔多克隆抗体,并检测该抗体的效价及特异性。方法:PCR方法以重组质粒PEF-NRBP为模板,获得NRBP全长及NRBP(1-99Aa)cDNA,构建到原核表达质粒pET-21a及pGEX-6P-1中。分别转入大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导表达后,纯化并鉴定表达产物将其免疫家兔,间接ELISA法及免疫印迹等方法鉴定抗体。结果:成功获得人NRBP的cDNA,构建得到相关的原核表达质粒,在大肠杆菌中可诱导性高表达,纯化后蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经ELISA检测为阳性结果,4只免疫家兔的抗体效价约为1:5 200～1:40 000。Western印迹结果显示,该抗体可特异性的识别真核细胞外源性及内源性约60kDa的NRBP蛋白,并且具有较强免疫沉淀能力。结论:NRBP多克隆抗体具有很好的特异性和敏感性,该抗体的成功制备为进一步研究NRBP的功能提供了重要工具。
2012年02期 v.22;No.129 16-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 335K] - 康立新;周玉玲;马立新;
目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖。方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21(DE3)。重组子经0.5 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和质谱检测与鉴定重组酶。酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物。结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45%左右。纯化后重组酶浓度为900 mg/L,纯度95%、回收率85%,酶活力为10 000 U/mg。壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖。结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖。
2012年02期 v.22;No.129 20-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 327K] - 杨允;邓春梅;韩明;黄艺娜;黄义德;
目的:构建重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP7)表达质粒,并研究其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达。方法:将hBMP7重组表达质粒电转到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中,并用DOT-BLOT和ELISA方法分析检测rhBMP7在重组CHO细胞中的表达。结果:hBMP7 cDNA整合到CHO细胞基因组中并被转录。点杂交和ELISA检测证实rhBMP7在CHO细胞中得到表达。结论:hBMP7成功在CHO表达系统中得到表达。
2012年02期 v.22;No.129 23-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K] - 张西锋;王丽梅;李万芬;
目的:将透明颤菌血红蛋白vgb基因应用于核黄素的工业化生产。方法:以枯草芽孢杆菌整合载体pAmyE构建了vgb基因的整合表达载体pAudV,采用化学转化法将vgb基因整合到枯草芽孢杆菌GJ08的染色体上,并通过发酵摇瓶实验检测核黄素的产量。结果:得到产核黄素枯草芽孢杆菌GJ09,摇瓶试验结果表明,在限氧条件下核黄素的产量分别提高了5.23%和3.42%。结论:透明颤菌血红蛋白vgb基因能够促进核黄素产量的提高,可以应用于核黄素的工业化生产中。
2012年02期 v.22;No.129 26-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 338K] - 朱昀;贾志伟;付俊杰;李朝炜;王国英;
目的:研究MYB基因在玉米雌穗不同发育阶段的表达情况,为探讨其生物学功能提供相关线索。方法:用芯片杂交的方法检测玉米雌穗早期发育过程中差异表达的MYB基因,定量PCR验证差异基因的表达情况,原位杂交分析差异基因的组织器官表达。结果:一个MYB基因在雌穗发育到小花分化期时上调表达(芯片分析其表达差异倍数为1.8)。其表达的差异性得到了定量PCR的验证(定量PCR分析其差异表达倍数为4.3)。原位杂交分析发现该基因主要表达于小穗的生长锥顶部和小花雌雄蕊原基部位。结论:MYB基因对玉米雌穗早期发育起到一定作用。
2012年02期 v.22;No.129 30-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 488K]
- 邵敏;周鹤峰;姬可平;李啸红;魏妮娜;李应东;
目的:探讨甘肃6个地区掌叶大黄的遗传多样性。方法:采用改良CTAB法提取6个地区样品的基因组DNA,应用RAPD(Randomly amplified polymorphic DNA)技术对电泳结果进行聚类分析,得出聚合树状图。结果:10条多态性引物共扩增得到51条电泳条带,大小在250～1 600bp之间,其中33条为多态性条带,多态性比率为64.7%。结论:聚类分析结果表明:甘肃6个地区掌叶大黄的亲缘关系与地理距离有一定的相关性。
2012年02期 v.22;No.129 33-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K] - 惠嫣婷;刘若余;张依裕;
目的:探究猪apoC3基因多态性,为进一步探讨其对脂肪沉积的影响和表达调控等研究提供依据。方法:选取具有不同脂肪沉积特点的3个猪种(可乐猪、贵州白香猪和大约克猪)构建品种DNA池并进行测序,结合各SNP位点测序峰高比值估算等位基因频率,并利用在线软件对不同基因型的转录结合位点及mRNA二级结构进行预测。结果:在3个猪种的apoC3基因中共发现17个SNPs(2个位于5’侧翼区;1个位于外显子3中,为同义突变;1个位于3’非翻译区,其它13个分别位于3个不同内含子中),其中C813G变异增加了一个转录因子GATA-2结合位点,G2280A变异导致mRNA二级结构最小自由能增加0.4kkal/mol。结论:不同猪种间apoC3基因SNPs位点等位基因频率差异较大,而apoC3基因编码区相对保守。
2012年02期 v.22;No.129 36-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K] - 王建红;范才文;何晓松;田晶;肖胜军;罗琴;向秋;
目的:构建CD44新剪接变异体siRNA质粒表达载体,建立CD44新变异体抑制表达的鼻咽癌细胞株。方法:合成CD44新变异体特异性干扰DNA片段,干扰DNA片段亚克隆于带绿色荧光蛋白的pGenesil-1.3质粒表达载体中,双酶切和测序鉴定重组表达质粒载体;采用脂质体将重组表达质粒载体转染入鼻咽癌5-8F细胞系,进行G418筛选;Western blot分析CD44表达。结果:重组CD44干扰DNA片段质粒表达载体的碱基序列和插入方向正确;细胞转染效率达70%;G418筛选获得GFP表达的单克隆鼻咽癌5-8F细胞株;Western blot分析表明CD44表达受抑制。结论:建立了CD44新变异体抑制表达的鼻咽癌细胞株,为CD44新变异体在鼻咽癌中的生物学功能提供了基础。
2012年02期 v.22;No.129 39-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 498K] - 鲁毅;李任峰;徐萍;李学斌;王三虎;
目的:预测来航鸡FOXL2蛋白的结构和功能。方法:生物信息学方法预测来航鸡FOXL2蛋白的组成,基本性质、同时构建其编码产物的系统进化树,并对其抗原表位进行预测。结果:该条氨基酸残基中脯氨酸含量最多,分子量为33 504.8,半衰期为30h,理论等电点为9.04,分子式为C1488H2269N425O432S15,在细胞核内发挥作用,可能具有转录和转录调控功能,与红原鸡的同源性最高,其最有可能的抗原表位位于37-49、82-91、133-147个氨基酸之间。结论:利用生物信息学方法预测其功能和结构,为对其下一步研究奠定基础。
2012年02期 v.22;No.129 43-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 633K] - 王兰萍;耿荣庆;冀德君;常洪;
目的:探讨H-FABP基因多态性与江苏地方山羊品种肌内脂肪含量之间的相关性。方法:PCR-SSCP标记技术检测2个江苏地方山羊品种H-FABP基因部分外显子和内含子区域的多态性,利用最小二乘法分析其与IMF含量的关系。结果:在H-FABP基因第2外显子区域发现1个多态性位点,分别定义为GG和GC 2种基因型。构建的固定效应模型显示,基因型GC的IMF含量含量高于基因型GG,在背最长肌和腿肌中GC基因型个体的IMF含量显著高于GG基因型(P<0.05)。结论:H-FABP基因第2外显子132 bp位点处GC基因型具有使IMF含量提高的遗传效应。
2012年02期 v.22;No.129 46-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K] - 刘露;李雅华;咸洪泉;
目的:实现棘孢木霉菌T4的遗传转化并优化其转化体系。方法:以潮霉素抗性为选择标记,利用农杆菌转化法介导转化棘孢木霉菌。结果:潮霉素基因成功整合到受体菌基因组中,转化子抗性基因可稳定遗传。结论:最优的转化体系和条件为:IM和CM培养基中AS浓度为200μg/mL,棘孢木霉T4孢子浓度为106/mL,农杆菌浓度为200μL(OD600约0.8),共培养时间为48 h,转化效率约为50个转化子/106个孢子。
2012年02期 v.22;No.129 49-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K]
- 颜林春;张守财;马校卫;汤二将;黄祖新;陈由强;
目的:从福建建瓯黄华山酿酒有限公司高温大曲中分离出89株芽孢杆菌,通过初步筛选鉴定并进行微生物多样性研究。方法:对其16S rDNA进行PCR-RFLP分析和系统发育研究。结果:初步筛选得到的18株芽孢杆菌被HhaⅠ和MspⅠ酶切聚类分为四大组。通过系统发育分析样品中有6株Bacillus subtilis,4株Bacillus cereus,2株Bacillus sonorensis,2株Bacillus licheni-formis,以及Bacillus pumilus、Bacillus oleronius、Bacillus coagulans和Bacillus thuringiensis各1株。结论:研究显示该高温大曲中可培养芽孢杆菌具有微生物多样性。
2012年02期 v.22;No.129 53-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 433K] - 杨芳芳;李爱芬;万凌琳;吴洪;尹顺吉;张成武;
目的:探讨3种真眼点藻(点状魏氏藻(Vischeria punctata)、波氏真眼点藻(Eustigmatos polyphem)、魏氏真眼点藻(Eu-stigmatos vischeri))和3种绿藻(栅藻(Scenedesmus sp.)、斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)、爪哇栅藻(Scenedesmus javaensis))对2种抗生素的敏感性。方法:采用藻液细胞计数法和藻细胞固体平板培养法研究了氯霉素和硫酸新霉素对6种微藻生长的影响。结果:液体培养,3种绿藻对氯霉素敏感性均高于硫酸新霉素,10μg.mL-1氯霉素即可明显抑制3种绿藻的生长(P<0.05),而硫酸新霉素在浓度为200μg.mL-1时才显示出明显抑制作用;3种真眼点藻对2种抗生素都不敏感。固体培养,除波氏真眼点藻外,其它5种微藻对氯霉素的致死浓度均为50μg.mL-1;波氏真眼点藻、栅藻、斜生栅藻和爪哇栅藻对硫酸新霉素的致死浓度分别为100μg.mL-1、200μg.mL-1、50μg.mL-1和50μg.mL-1。结论:氯霉素可作为选育6种微藻抗性突变株的筛选剂。
2012年02期 v.22;No.129 58-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K] - 马赟;索菲娅;王傲立;黄罗冬;叶星;张琳;李萍;龚健;
目的:从采自阿尔泰山脉的虫[Ophiocordyceps gracilis(Grev.)G.H.Sung,J.M.Sung,Hywel-Jones&Spatafora]体内分离出1株出现频率较高的真菌(命名为SFY00C3)进行了研究。方法:经形态学和ITS序列分析鉴定,对SFY00C3菌株及其发酵液采用滤纸片法,同时对6种供试菌株不同程度进行了抑制作用的研究。结果:SFY00C3菌株为青霉属(Penicillium)真菌变灰青霉(Penicillium canescens);对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用较强,抑菌圈均大于10 mm。结论:虫草内生菌变灰青霉的抑菌活性成分值得进一步研究,为研究新的天然产物抑菌药物提供思路。
2012年02期 v.22;No.129 64-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 281K] - 马金亮;程辉彩;张丽萍;王宏伟;习彦花;梁柱;
目的:筛选产甲烷菌并对其进行鉴定和特性分析。方法:利用亨盖特厌氧操作技术从河流污泥中分离出的一株产甲烷杆菌。通过形态特征、生理生化、16S rRNA基因序列分析确定菌株的分类地位,利用气相色谱仪测定甲烷含量。结果:该菌株杆状,产芽孢,极端严格厌氧,宽约0.36μm,长约3.20μm,有时观察成链状,在液体培养的过程中,聚集成絮状沉积在管底。能够利用H2/CO2和甲钠盐生长,不利用甲醇、三甲胺、乙酸和二级醇类。最适生长温度范围为37℃,最适pH为7.5～8.0,能在0～1%盐浓度范围内生长。结论:菌株AG的最适温度较高,最适pH偏碱,在沼气发酵中具有重要应用前景。
2012年02期 v.22;No.129 67-70页 [查看摘要][在线阅读][下载 399K] - 高娃;于德水;刘佳宁;戴肖东;韩增华;
目的:为了获得桦褐孔菌多糖最大量的多糖收率,研究了影响多糖提取的最佳条件。方法:对影响桦褐孔菌胞内水溶性多糖提取效果的6个因素进行了单一因素影响实验,并对多糖提取影响因子的3个因素进行正交试验,对多糖提取工艺参数进行了优化。结果:正交试验确定桦褐孔菌子实体多糖的最佳提取条件是:料水比为1:40,温度80℃,提取1.5 h,多糖收率达2.53%。结论:确立了桦褐孔菌子实体多糖提取工艺,建立了一套简便、高效的桦褐孔菌胞内多糖的提取方法。
2012年02期 v.22;No.129 70-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
- 许玉兰;蔡年辉;康向阳;段安安;
SSR标记是基于PCR基础上的一种分子标记,其扩增效果直接影响到SSR分析,近年来从不同方面对SSR-PCR反应体系的建立与优化进行了大量的研究。该文简要介绍SSR-PCR扩增反应体系建立的方法,综述SSR-PCR扩增反应的应用及其近展,并对存在的问题进行探讨,对今后的发展进行展望,以期为从事该方面的研究奠定基础。
2012年02期 v.22;No.129 73-76页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K] - 范翠英;冯利兴;樊金玲;果德安;刘璇;
利用基因重组表达外源蛋白在现代生物学技术的发展与应用中起着重要的作用。根据外源基因表达宿主不同,可以将表达系统大致分为两类:原核和真核表达系统。该文比较了常见的几种表达系统的优缺点,并探讨了在选择适合的表达系统时所需要考虑的因素如目标蛋白的产量、生物学活性、用途及其物理化学性质以及表达系统本身的成本、便利性及其安全性等,以便于选择适合的表达系统,优化提高重组蛋白产量等,进而更好地服务于科学研究。
2012年02期 v.22;No.129 76-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K] - 夏海华;于冲;曲晓军;孙建华;王金英;
在免疫缺失、囊肿性纤维化、烧伤烫伤等患者的临床继发感染中,绿脓杆菌是引起感染的主要病原菌之一,其合成的细胞外毒性物质—绿脓杆菌外毒素A(PEA)被认为是引起感染的最关键内在机制。该文对中外学者们在PEA的结构、功能、提取和纯化方法、重组毒素、基因工程疫苗以及应用等方面的研究进行归纳总结,并对研究和应用中存在的问题加以分析,对预防和治疗绿脓菌感染、抗肿瘤、抗移植排斥和治疗自身免疫性疾病等具有重要而深远的意义。
2012年02期 v.22;No.129 81-85页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K] - 李莹莹;
随着花香挥发物提取和检测技术的不断发展以及该技术与分子生物学研究的结合,花香挥发物的生物合成途径和调节机制的研究取得了较大进展,为花香的遗传控制和育种研究奠定了良好的基础。萜烯类和苯丙酸类/苯环型化合物是植物花香挥发物的重要化学成分,它们分别由甲羟戊酸-甲基赤藓醇磷酸途径、莽草酸途径等途径生成,调节机制较为复杂,但以前体物生物合成调节为主。两类花香物质在许多行业得到了应用广泛,但相关研究有待于进一步深入。
2012年02期 v.22;No.129 86-91页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K] - 高永超;王加宁;迟建国;孔学;刘华;曾德慧;
土壤微生物群落结构多样性检测是土壤修复、监测、评估时的一个重要参数。由于绝大多数微生物在实验室条件下是不可培养,因而早期依赖于微生物培养的检测结果代表性不强。20世纪90年代以来,不依赖于微生物培养的分子生物学方法是研究微生物群落结构的重要手段。该文对近年来土壤污染微生物群落结构研究所采用的主要分子生物学方法按照其原理进行了比较、分析、总结。根据不同技术的灵敏度、优缺点分析了其适用范围。指出了目前技术中存在的一些共性问题和缺陷并展望了土壤修复领域分子生物学技术的发展趋势。
2012年02期 v.22;No.129 91-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K] 下载本期数据