- 李小明;郭丽琼;黄秀琴;林俊芳;白曦;
目的:从葡萄中克隆白藜芦醇合酶基因vrs1并对其序列进行生物信息学分析。方法:利用葡萄总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆白藜芦醇合酶基因vrs1并亚克隆进T-Vector。利用生物信息学工具对其核酸和蛋白序列进行分析。结果:测序结果显示其cDNA序列全长为1 257bp,含有一个1 179bp的开放阅读框。生物信息学分析表明葡萄白藜芦醇合酶基因编码392个氨基酸,分子量为42.9kDa,理论等电点为5.97,具有芪合酶家族固有的氨基酸保守结构域,二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角组成。结论:该基因的克隆、生物信息学分析为进一步研究其功能奠定了基础。
2011年05期 v.21;No.126 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 1399K] - 陈国强;陈忠翔;王萍;
目的:电子克隆并分析泥鳅MnSOD基因。方法:通过电子克隆泥鳅MnSOD基因的开放阅读框,并对其氨基酸组成、功能结构域、系统进化、信号肽、二级结构、三级结构等信息进行预测分析。结果:通过电子克隆获得泥鳅MnSOD基因的cDNA。该基因的开放阅读框大小为675bp,编码224个氨基酸残基,推导的蛋白质分子量为25kDa,等电点约为8.41,其编码序列与其他物种相比非常保守,与鲤形目淡水鱼的MnSOD在进化上亲缘关系最近。其N端含转运肽,推测它定位于线粒体中。预测泥鳅Mn-SOD的二级结构及三级结构含有较多的不规则卷曲和α螺旋,其N端为两个长的反平行螺旋,C端则为含有拧成三股折叠片的α+β结构。结论:该研究为泥鳅进一步的分子生物学及抗氧化研究奠定了基础。
2011年05期 v.21;No.126 5-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 2072K] - 张西锋;王丽梅;刘梁;李万芬;
目的:构建产核黄素的枯草芽孢杆菌基因工程菌。方法:以穿梭载体pEB03构建核黄素操纵子的表达质粒载体pGJB13和pGJB14,与质粒pMX45分别转化产核黄素的枯草芽孢杆菌GJ07,并通过发酵摇瓶实验检测核黄素的产量。结果:得到产核黄素的工程菌GJ13、GJ14和GJ08,在以蔗糖为碳源的发酵条件下,GJ08可产核黄素820mg/L,提高了约55%。结论:得到了产核黄素的高产菌种GJ08。
2011年05期 13-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 847K] - 梁昌镛;李敏;张高瞻;
目的:原核表达棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)iap3基因,制备该蛋白的多克隆抗体,并利用该抗体分析iap3基因在病毒感染过程的表达时相,为深入研究提供基础。方法:PCR扩增iap3基因后,克隆至pET28b,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,利用亲合层析进行蛋白纯化,将纯化融合蛋白免疫大鼠制备抗血清,利用抗血清Western blot检测IAP3在病毒感染过程的表达时相。结果:成功在原核细胞中表达iap3基因,并获得纯化的融合His-tag的IAP3蛋白,制备了该蛋白的多克隆抗体。发现iap3基因最早在感染后24h表达,到72h到达表达高峰。结论:获得了IAP3多克隆抗体,iap3基因是一个晚期表达基因。
2011年05期 15-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 978K] - 孙廷丽;施庆珊;欧阳友生;谢小保;陈仪本;
目的:研究透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在产聚γ-谷氨酸(γ-PGA)的地衣芽孢杆菌ATCC9945a中的表达及对其生物量和产量的影响。方法:以大肠杆菌-枯草芽孢杆菌的穿梭表达载体pUBC19为骨架,构建含有枯草芽孢杆菌的组成型启动子P43和透明颤菌血红蛋白结构基因的穿梭表达载体pUBC19-PV,并通过电击转化得到重组的产γ-PGA的地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)。一氧化碳差光谱验证重组B.licheniformis中是否表达了有活性的血红蛋白。摇瓶发酵试验研究重组菌株和对照菌株生物量和发酵产物产量的变化。结果表明,重组菌株的生长明显比对照菌株快,但是γ-PGA的产量却比原始菌株低:在正常供氧时,其产量12.8g/L,比亲株产量21.7g/L下降了41%,贫氧环境下产量8.8g/L,比亲株产量12.8g/L降低了31%。结论:vgb在重组菌株中表达了有活性的的透明颤菌血红蛋白,并可以促进细胞的生长,但聚谷氨酸的产量却有所下降。文章针对聚γ-谷氨酸产量的下降原因进行了讨论,并对下一步的工作提出了建议。
2011年05期 v.21;No.126 16-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 1510K] - 陈维春;刘振杰;蒋智文;彭琪;袁源;郑慧玲;刘新光;
目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。
2011年05期 24-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 1238K] - 娄丽;高学军;
目的:克隆玉米中富含蛋氨酸的10kD玉米醇溶蛋白,证明植物源目的基因在大肠杆菌中能够表达。方法:从玉米胚乳中克隆高蛋氨酸基因zein,通过PCR扩增zein片段,连接pGEX-4T-1原核表达载体,转入大肠杆菌中,IPTG诱导后,HPLC测定蛋氨酸含量。结果:经PCR扩增出467bp条带,Blast分析同源性99%,经IPTG诱导进行SDS-PAGE检测,发现在36kD处出现一条明显的条带。诱导后菌体总蛋氨酸含量比正常菌体提高了9.6%。结论:证实了植物源10kD玉米醇溶蛋白在大肠杆菌中能够表达。
2011年05期 29-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 1159K] - 李晓晓;徐舒;李慧;宫夏霓;徐志卿;
目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况。结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1 047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5~15min后受体下膜进入胞浆。结论:成功构建真核表达载体mGalR1-pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象。
2011年05期 v.21;No.126 30-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 1262K] - 林岚;谭仁祥;
目的:从拟南芥叶中克隆水杨酸结合蛋白(SA binding protein 2,SABP2,也称水杨酸受体)基因sabp2进行异源表达并测定其活性。方法:从拟南芥叶RNA中通过反转录PCR扩增sabp2,将PCR产物克隆至载体pMD-19T simple中,经测序验证后,再基于pET28a构建重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并表达,检测重组蛋白的活性。另一方面,对sabp2在拟南芥中转录水平进行了研究。结果:PCR获得792bp的sabp2基因,并成功构建异源表达载体pET28a-sabp2。优化结果表明,在0.4mmol/L IPTG诱导下20℃培养8h,表达产物活性较强,具天然SABP2的特征性酯酶活性。该基因在拟南芥叶中转录模式呈SA应激性和组织特异性。结论:sabp2成功表达,不仅为筛选SA受体拮抗剂提供新的原核体系,而且为探讨SA与SABP2相互作用在植物防御过程中时空变化奠定基础。
2011年05期 36-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 1451K] - 刘延杰;林鲁霞;宋长征;季虹;荣海钦;
目的:完成钝尾毒蜥Exendin-4基因在大肠杆菌中的串联高效表达。方法:按照大肠杆菌偏爱密码子设计Exendin-4基因片段,利用同尾酶构建多拷贝串联的表达载体,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE鉴定结果,表达产物Ni柱纯化后肠激酶切割,高效液相色谱及四级杆-飞行时间质谱纯化、鉴定,确定目标产物,作用胰岛瘤细胞INS-1检测胰岛素释放活性。结果:成功构建重组载体pET28a-(Exendin-4)n(n=2,4,6),且均获得可溶性表达产物,重组表达蛋白经切割、纯化、鉴定和制备,最终得到纯度98%的Exendin-4,其具有与标准品相似的促葡萄糖刺激的胰岛素释放活性。结论:试验成功利用串联表达方式制备有活性的Exendin-4,为下一步2型糖尿病治疗药物的研究奠定了基础。
2011年05期 42-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 1451K] - 陈茜茜;王京华;张香春;宋硕;李鹏;高凤山;
目的:建立荷包猪SLA-2原核表达系并研究SLA-2在pET-32中的表达。方法:设计SLA-2胞外区的表达引物,亚克隆荷包猪SLA-2的胞外区,并转化入原核表达系统pET-32进行表达,SDS-PAGE分析其表达产物的特性。结果:PCR结果显示,SLA-2胞外区亚克隆大小为840bp,酶切鉴定证实成功插入pET-32表达载体,构建重组质粒pET-32a(+)/SLA-2。SDS-PAGE显示,SLA-2基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小为51.4ku,与预期结果相符,蛋白相对表达含量达到了45%。结论:结果表明荷包猪SLA-2在pET-32系统中成功表达,蛋白表达量符合要求,可用于下一步的结构和功能检测。
2011年05期 v.21;No.126 45-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 1273K]
- 张伟;郑丽玲;韩璐;马玲玲;魏延宏;张薇;
目的:分离出棉花抗枯萎病基因片段,并Blast分析其差异片段。方法:以抗枯萎病的棉花品种中棉12号为材料,采用苗期水培方法于三叶期进行枯萎病菌诱导处理,以不接菌为对照。用64对选择性扩增引物对诱导处理和对照的cDNA进行AFLP分析。结果:得到25个阳性差异片段,在GenBank中进行同源性序列比对,24个片段在GenBank数据库中发现同源序列,有1个功能未知。结论:作物的抗病机理复杂,涉及物质和能量代谢,信号传导,逆境响应及蛋白功能调控等方面。
2011年05期 50-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 1340K] - 张玉;白史且;李聪;李达旭;邓永昌;王涌鑫;
目的:研究菊苣再生植株的遗传稳定性。方法:以菊苣叶片为外植体,经第一代和第二代体细胞再生获得再生植株,分别对再生植株提取DNA,从12个引物中筛选了2个多态性好的引物,对第一代和第二代体细胞再生植株进行RAPD标记。结果:菊苣第一代体细胞无性系没有发生DNA多态性变异,第二代体细胞无性系在分子水平发生了1条DNA多态性变异。结论:RAPD分子标记方法可以鉴定菊苣组织培养过程中的遗传稳定性和遗传变异,为菊苣快繁和遗传转化奠定了基础。
2011年05期 53-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 1533K] - 梁静娟;徐勇;谢雨;庞宗文;莫莉;彭幸;
目的:研究广西热带地区嗜热真菌的多样性。方法:从广西热带地区各地采集的土壤样品,将土样撒在PDA平板上,50℃高温培养,挑取真菌菌丝进一步划线分离纯化,20℃低温培养验证获得嗜热真菌,对其进行形态观察和ITS基因序列分析。结果:共分离到33株嗜热真菌,形态和分子生物学鉴定结果显示分离到的菌株中有20株属于Thermomyces lanuginosus,4株属于Thermoascus aurantiacus,1株属于Chaetomium thermophilum,1株属于Talaromyces emersonii,1株属于Myceliophthora thermophila,还有6株的ITS序列与已知真菌的同源性很低,尚无法鉴定到种属。结论:广西热带地区的嗜热真菌存在多样性,Thermomyceslanuginosus为该地区主要嗜热真菌种。
2011年05期 v.21;No.126 54-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 2474K] - 付涵予;任嘉红;黄麟;叶建仁;
目的:一种适用于双向电泳体系的松材线虫全蛋白提取方法的建立及其双向电泳体系的优化。方法:以松材线虫为实验材料,比较2种不同的蛋白提取方法,并对双向电泳中的IPG胶条长度、IPG胶条最适pH范围、上样量等3个方面的条件进行优化。结果:采用TCA-丙酮法提取的蛋白质浓度较高,达到2.18μg/μl。使用pH 5~8、24cm的IPG干胶条,上样量为120μg,经双向电泳分离可得到背景清晰、分辨率较高的2-DE图谱,能检测到2 000个左右清晰的蛋白点,含有相对丰富的蛋白信息量。结论:该实验所建立的松材线虫提取方法和优化体系可以为今后松材线虫蛋白质组学的研究奠定技术基础。
2011年05期 v.21;No.126 58-62页 [查看摘要][在线阅读][下载 2109K] - 易霞;韦良焕;
目的:为了探讨3株Pseudomonas sp.对吡啶降解存在多样性。方法:基于16S rRNA和ISR序列分析,对3株分离菌株进行初步鉴定,进而通过Touch-Down PCR,对3株细菌降解吡啶的多样性进行分析。结果:3株细菌XJUHX-1、XJUHX-12和XJUHX-16初步鉴定为Pseudomonas,3株实验菌株的部分降解基因的扩增条带有差异。结论:同属的3株Pseudomonas在吡啶降解上存在多样性。
2011年05期 65-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415K] - 陈云娇;陈莉敏;美亮;张德著;史云涛;张汉波;
目的:使用核酸染料Genefinder检测琼脂糖凝胶中的核酸,通过比较预染样品法、胶内染色法和后染法三种染色方法的染色效果,了解该染料的染色特性,以期找到性能稳定,染色效果好的染色方法。方法:在琼脂糖凝胶电泳中,以不同的染色方法使用核酸染料Genefinder进行染色,对染色结果进行比较分析。结果:使用电泳后染色方法染色效果较好,胶内染色法次之,预染样品法效果最差。结论:核酸染料Genefinder会干扰DNA的迁移效率,因此,使用Genefinder进行电泳后染色是一种较好的染色方法。
2011年05期 v.21;No.126 66-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 1507K]
- 何艳;郭泽经;叶仁元;晏菊芳;田永强;
目的:分离具有抗肿瘤作用与抗菌作用的内生放线菌,并对其进行分子鉴定和系统发育分析。方法:从皱叶南蛇藤中分离内生放线菌,通过滤纸片法和SRB法对其进行抗菌活性和抗肿瘤活性筛选,然后利用菌株形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析对活性菌株进行鉴定。结果:从皱叶南蛇藤中分离到10株内生放线菌,其中内生放线菌LCB369具有较好的抗菌活性和抗肿瘤活性,该菌对5种致病菌和肝癌细胞株HepG2均有抑制作用。经分子分类学分析鉴定,该菌与Strep-tomyces microflavus在同一个分支上,同源性为99%。结论:皱叶南蛇藤内生菌LCB369具有明显抗菌和抗肿瘤作用,经鉴定为链霉菌Streptomyces microflavus。
2011年05期 70-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 1617K] - 惠明;侯银臣;田青;尚小利;
目的:探讨不同碳氮源对胶质芽孢杆菌GSY-1的生物脱硅效果的影响。方法:采用单因素试验并结合方差分析确定影响GSY-1生物脱硅的碳氮源种类及浓度,通过回归实验及响应面分析进一步优化培养条件,然后利用10L发酵罐进行放大实验验证。结果:研究发现,乳糖和尿素对GSY-1生物脱硅的影响均显著,其中尿素10g/L及乳糖13g/L时,培养液中铝硅比(A/S)分别可由2.84提高到5.45和5.42,通过响应面优化实验,确定尿素10.35g/L、乳糖12.60g/L时,菌株GSY-1的脱硅效果最佳,铝硅比由2.84提高到5.67,增幅达99.65%。经10 L发酵罐放大实验,测得浸矿后的铝硅比为5.07,较浸矿前提高78.52%。结论:乳糖和尿素对胶质芽孢杆菌GSY-1脱硅效果影响显著,响应面法可有效用于GSY-1菌株脱硅条件的优化。
2011年05期 74-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 1509K] - 汤鸣强;连桂兰;
目的:研究培养条件对吡虫啉杀虫剂降解菌苍白杆菌BB-1(Ochrobactum sp.BB-1)生长的影响。方法:采用超声波破碎菌体细胞得到粗酶液;应用单因素试验研究培养条件对吡虫啉杀虫剂降解菌Ochrobactum BB-1生长的影响。结果:降解酶定域试验表明,BB-1吡虫啉降解酶属于胞内蛋白组分。适合Ochrobactum BB-1生长的最佳碳、氮源分别是甘露醇和酵母膏,浓度分别为30g/L和16g/L;最适培养条件为pH 7.0,250mL三角瓶培养基装液量70mL,培养温度30℃。结论:苍白杆菌BB-1(Ochrobactum BB-1)生长条件要求简单,适于进一步研究其对吡虫啉杀虫剂的降解性能。
2011年05期 77-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 1556K] - 庞浩;裴建新;左文朴;黄日波;
目的:蔗渣是一种重要的可再生生物质资源,蔗渣原料生产丁醇将大大降低丁醇的成本。方法:实验利用0.25~3.0%不同浓度稀H2SO4对蔗渣进行121℃的高温作用1h,以水解液为碳源,进行丁醇的发酵实验。结果:相对于8052菌株,13-2菌株对甘蔗渣水解液具有更高的发酵效率,在0.5%硫酸用量条件下,13-2菌株的丁醇发酵量最高,达到4.5g/L。而8052只有2.3g/L的丁醇发酵量。结论:在同等条件下,拜氏梭菌菌株13-2比模式菌株8052具有更高的溶剂产量和抑制物耐受能力,最佳的蔗渣水解条件为1.5%硫酸用量,丁醇发酵量和总溶剂分别为4.57g/L和5.41g/L。
2011年05期 81-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 1456K] - 刘晓;刘逸寒;别松涛;徐星;谢进霞;李建勋;韩开林;路福平;
目的:研究赭曲霉高密度培养的发酵培养基及条件,实现坎利酮的高转化。方法:选取廉价易得的培养基成分并进行优化,同时对发酵条件进行优化,得到了最优发酵培养基配方及培养条件。结果:发酵培养基最优配方为:葡萄糖20g/L,玉米浆20g/L,酵母膏20g/L,K2HPO4 2.5g/L。种子液最佳培养时间为24 h,发酵培养基初始pH 5.8,接种量为8%,装液量200mL/1 000mL,摇床转速为180 r/min,28℃,底物投料时间24 h,发酵结束时间72 h。结论:将该工艺在7 L发酵罐中放大,菌体密度达到25.36g/L,11α羟基坎利酮的转化率为86.1%。
2011年05期 v.21;No.126 82-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 1546K]