苏云金杆菌几丁质酶新基因的筛选和全长基因的扩增

以煮沸冻融法制备PCR扩增模板 ,利用苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)几丁质酶基因特异引物进行 15个Bt血清变种的扩增分析 ,获得 9个几丁质酶全长基因扩增产物。经克隆和序列测定 ,从Btserovar.entomocidusHD10 9、Btserovar.canadensisHD2 2 4、Btserovar.alestiHD16和Btserovar.toumanoffiHD2 0 1等 4个菌株中分离了几丁质酶新基因

人胰高血糖素样肽-1突变体基因的克隆及表达

目的 :克隆人胰高血糖素样肽 - 1突变体 (2 Gly -hGLP - 1)基因 ,高效表达GST - 2 Gly -hGLP - 1融合蛋白。方法 :在获得重组hGLP - 1基因工程菌基础上 ,利用定点突变技术改造其第 2位丙氨酸为甘氨酸 ,经酶切克隆于pGEM - 7z(+)载体中 ,构建pGEM - 7z(+) / 2 Gly -hGLP - 1克隆载体 ,双酶切鉴定后把2 Gly-hGLP - 1基因定向插入pGEX - 4T - 3多克隆位点 ,构建pGEX- 4T - 3/ 2 Gly-hGLP - 1融合表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)并进行诱导表达。结果 :经双酶切鉴定和测序分析 ,证明2 Gly-hGLP - 1基因已克隆到pGEX - 4T - 3载体中。SDS -PAGE和凝胶扫描分析 ,融合蛋白以可溶形式存在 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 9.7%。表达产物经亲和层析纯化后纯度在 95 %以上 ,免疫印迹证实 ,该融合蛋白可被特异性hGLP - 1(7- 37)抗体所识别。结论 :为产业化规模制备hGLP - 1突变体提供技术线路

沼泽红假单胞菌偶氮还原酶新基因的克隆表达

前期实验证明沼泽红假单胞菌 (Rhodopsedomonaspalustris)对偶氮染料有较强的降解能力 ,通过PCR扩增 ,从该菌质粒DNA中扩增获得了一条未登录新基因PAR - 1。将该基因构建到融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1,通过IPTG诱导 ,进行原核蛋白表达 ,SDS -PAGE电泳显示 ,有约 4 8kD融合蛋白表达。对经诱导的大肠杆菌 (BL2 1)进行偶氮染料脱色试验 ,检测到轻微脱色活性

植酸酶phyC基因表达载体的构建及其在E.coli中的表达

以phyC -PUC18-T为模板 ,扩增出枯草芽孢杆菌中性植酸酶phyC基因 ,克隆至T载体中 ,经酶切鉴定及序列测定后重组入谷胱甘肽S -转移酶融合表达载体pGEX - 4T - 1中 ,转化大肠杆菌JM10 9,重组质粒在宿主JM10 9中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 4 5次基本保持稳定 ,0 1mMIPTG诱导后酶活测定结果表明 ,表达产物具有生物学活性。SDS -PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,相对分子量 (Mr)为 6 9kD ,30℃诱导 3h后 ,表达的目的蛋白量占菌体总蛋白的 4 7 4 %。

高山被孢霉△~6-脂肪酸脱氢酶基因转化大豆的研究

采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将高山被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因导入到栽培大豆吉林 4 3和黑农37品种中。经农杆菌浸染和共培养后 ,在含 5 0mg/L卡那霉素的选择培养基上连续筛选 ,获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析 ,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。通过GC -MS对大豆种子进行脂肪酸色谱分析 ,结果表明 ,产生了γ -亚麻酸 ,其含量最高可达 18.2 3%。

春小麦体细胞无性系变异的研究

利用RAPD技术检测春小麦愈伤组织和再生植株在离体培养过程中产生的变异 ,对培养不同时期的愈伤组织、再生植株检测结果表明 ,在小麦离体培养愈伤组织和再生植株中 ,RAPD谱带发生变化 ,表明发生了体细胞无性系分子水平变异 ,且具有明显的规律性和变异特点 :杂交F2 代幼穗培养获得的愈伤组织发生变异的频率高于遗传稳定品种幼穗培养获得的愈伤组织。在愈伤组织培养 75d时 ,在RAPD电泳图谱反映出高频率的亲本谱带缺失和非亲本谱带增加。不同基因型或外植体诱导的愈伤组织和再生植株中出现了相同的变异。与愈伤组织相比 ,再生植株中检测到的变异频率更高。不同外植体离体培养获得的再生植株 ,即使表型上没有观察到变异 ,但从RAPD图谱上却反映出变异的发生。表明RAPD技术可以快速方便地检测组织培养每个阶段出现的DNA水平变异

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA ,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值约为 2∶1,紫外吸收值A2 60 /A2 80 为 1.91- 2 .0 6 ,产率为 6 9.2 - 87.5 μgRNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT -PCR和cDNA文库构建等的需要 ,是一种高效的荞麦RNA提取法

大孔吸附树脂固定猪胰脂酶的初步研究

目的 :为促进脂肪酶在工业上的应用 ,对以大孔吸附树脂为载体的猪胰脂酶固定进行了研究。方法 :以吸附法固定 ,用单因素法考察了吸附条件对固定的影响。按Eadie -Hofstee法测定了固定化酶及游离酶的表观米氏常数 ,并具体研究了固定化酶的操作稳定性、热稳定性等性质。结果 :固定化酶的比酯交换能力比游离酶上升 6倍 ;最优的吸附条件为 :pH7.0 ,酶加量30 0mg/g,水分含量 2 0 % ;吸附时间 4h ;固定化酶在含水量 10 %时可稳定操作 5批次 ;同时固定化酶有比游离酶有更好的热稳定性。结论 :以大孔吸附树脂为载体对猪胰脂酶进行固定是可行的 ;与游离酶相比 ,所得固定化酶有着更高的比酯交换能力和更好的稳定性 ,更为适用于工业化生产

正交设计法在刺叶墙藓原代组织培养中的应用

以从新疆采集的刺叶墙藓 (Tortuladesertorum)为研究对象 ,采用正交实验设计法对刺叶墙藓的原代组织培养基进行了筛选。从而找出最佳的培养基配方为 :Hogland +2 2 5× 10 -7mg/L 6 -BA +0 .5mg/LNAA +1.73× 10 -5mg/LGA3 +0 .5mg/L 2 ,4 -D +0 .1%葡萄糖 +1%琼脂

肌苷产生菌guaA基因的修饰

由于肌苷生产菌枯草杆菌JSIM - 10 19,腺嘌呤缺陷 ,但黄嘌呤并不缺陷。以鸟苷产生菌枯草杆菌JSIM -G - 5 18为供体菌 ,得到编码IMP脱氢酶的guaA基因。并用氯氨苄抗性基因插入guaA基因 ,使之不产生活性IMP脱氢酶 ,从而可制备黄嘌呤缺陷的新菌株 ,从而可以制备肌苷产量高于JSIM - 10 19的新菌株

牛血清白蛋白对超氧化物歧化酶的化学修饰

目的 :通过化学修饰提高超氧化物歧化酶 (SOD)的稳定性 ,考察金属离子在不同浓度下对SOD活性的影响。方法 :用戊二醛作为交联剂 ,用牛血清白蛋白 (BSA)将牛红细胞超氧化物歧化酶进行化学修饰 ,得到SOD的修饰酶。对比研究三种SOD∶修饰酶 ,混合酶及天然酶的理化性质。结果 :修饰酶等电点降低 ,对温度、pH的稳定性较天然酶有很大提高 ,对胰蛋白酶和胃蛋白酶也表现出很强的耐水解性。二价离子Mg2 + 、Mn2 + 对三种SOD活力均有不同程度的抑制作用 ,Ca2 + 、Zn2 + 、Cu2 + 对修饰酶活力有激活作用 ,一价离子K+ 对三种OSD活力均无明显影响。结论 :修饰酶较天然酶的稳定性有很大的提高 ,加入Ca2 + 、Zn2 + 、Cu2 +可提高修饰酶的活力

鸡冠花食用色素安全性的研究

目的 :应用卫生毒理学原理 ,对鸡冠花 (CelosiacristataL.)色素的食用安全性进行研究。方法 :采用原子吸收分光光度法对色素中有害微量元素As、Pb、Hg和Cu进行检测 ;利用小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和小鼠睾丸染色体畸变试验等进行毒理学研究。结果 :鸡冠花色素粗品、鸡冠花红色素和橙黄色素中 ,有害微量元素含量均低于国家食品卫生标准。急性毒性试验表明 ,鸡冠花色素粗品属于无毒级物质 ;鸡冠花红色素和橙黄色素为实际无毒级物质。而且毒理学试验检测表明 :均呈阴性 ,无致突变性。结论 :鸡冠花色素具有较好的食用安全性 ,可以作为天然食用植物色素使用

假蜜环菌液体深层发酵条件的研究

对该真菌菌丝体的液体深层培养条件进行了探讨为进一步工业化发酵提供参考数据。方法 :在基本培养基的基础上分别改变碳源、氮源、无机元素和C/N比对该菌的液体深层发酵情况 ,包括测量各培养条件下耗糖情况、绘制生长曲线 ,观察菌体的生长形态等等。结果 :假蜜环菌的菌丝产量在第 6d可达到最大值 ,其后会逐渐降低 ,并伴有溶菌的现象发生。在培养初期加入微量钴元素有利于刺激糖代谢提高菌体对糖的利用率 ,其作用主要是缩短延滞期。进入指数生长期后连续补加碳源有利于菌体迅速生长。优化后培养基组成为 :葡萄糖 1%和蔗糖 1%为碳源 ,以酵母浸膏 1%为氮源 ,KH2 PO40 1% ,MgSO40 0 5 %Z ,元素钴适量。液体深层发酵培养 6d后菌丝生长状态已达到最佳 ,在此条件下搅拌发酵培养可收获 2 0mg/ml(干重 )的菌丝体

链霉菌Strs-2产木聚糖酶的条件及部分性质研究

通过碳氮源对链霉菌Strs- 2产胞外木聚糖酶活性的影响 ,得出其适宜培养基为 (g/L) :含半纤维素 2 0 ,(NH4) 2 SO44.0 ,KH2 PO41.0 ,MgSO4·7H2 O 0 .5 ,NaCl0 .3,CaCO3 1.0。用DNS法研究了该酶的性质结果表明其最适pH值为 6 .5 ,最适反应温度为5 5℃ ;Na+ 、K+ 、Ca2 + 、Mg2 + 等离子对酶有激活作用 ,而Zn2 + 、Ag+ 、Fe3 + 和Cu2 + 离子则抑制酶的活性

生物有机肥料对人参重茬栽培地土壤微生态环境的影响研究

在人参重茬栽培地施用人参重茬剂和生物有机肥料 ,以改善其土壤微生态环境 ,提高人参的产量和品质。试验结果表明 :人参重茬剂可以抑制人参锈斑和腐烂现象 ,生物有机肥料可以改善人参重茬栽培地的微生物数量、pH值、有机质及速效N、P、K等微生态指标 ,使人参的产量提高 10 - 30 % ,品质得到很大提高

不同化合物对烟草赤星病菌毒素的钝化研究

为确定几种不同化合物对烟草赤星病菌产生的毒素毒性的影响 ,作者采用摩擦接种处理法、浇根处理法、种子根处理法 3种生物测定方法 ,确定了以烟草种子根处理法作为烟草赤星病菌的毒性测定方法。用 6种化合物分别以 5种不同浓度与AT毒素混合接种 ,根长测定结果表明 :氯化铁、硫酸亚铁、硫酸锰和柠檬酸在 0 .0 2 - 2 0mg/mL浓度范围内、钼酸钠在 0 .0 2 - 2mg/mL浓度范围内对对烟草赤星病菌毒素有明显钝化作用 ;所有处理中钼酸钠 0 .0 2mg/mL、柠檬酸 0 .0 2mg/mL浓度处理效果最好 ,其次为钼酸钠 0 .2mg/mL处理浓度

两种微藻在光生物反应器中的生长和胞内多糖含量研究

利用气升式光生物反应器就光照周期、光质和通气速度对湛江叉鞭金藻和盐藻的生长和胞内多糖含量进行了研究。结果表明 :(1)湛江叉鞭金藻和盐藻在亮暗比分别为 12L∶12D和 18L∶6D时生长最快 ,在 18L∶6D下两种微藻多糖含量较高 ;(2 )不同光质比较 ,叉鞭金藻在蓝光、红光下 ,盐藻在红光、白光下有较高的生长速率和多糖含量 ;(3) 6 0 0ml/min的通气速度可以获得较好的培养效果

人免疫球蛋白制造工艺改进的研究

目的 :提高人免疫球蛋白的纯度、热稳定性 ,缩短生产周期。方法 :在原生产工艺的基础上将CohnⅡ的溶解液进行一步提纯 ,即进行一步乙醇冷沉淀 ,去除脂蛋白等杂蛋白。结果 :改进后的生产工艺 ,人免疫球蛋白的纯度由原来的 90 %左右提高到98%左右 ,热稳定都有很大提高 ,5 7℃ 4h后略现乳光略加重 ,无凝胶化、无絮状物产生 ,制品成品检定合格即可发出 ,无须放置 ,缩短了生产周期。改进后的生产工艺效果显著 ,工艺可行

离子束介导DNA大分子遗传转化的研究

离子束介导DNA大分子转移的方法已成为离子束生物工程学的重要内容之一。该文探讨了离子束介导DNA大分子转移的原理、应用及其前景

纳豆激酶基因工程研究进展

昆虫抗冻蛋白的研究

抗冻蛋白是具有热滞活性 ,能结合并抑制冰晶生长和抑制冰的重结晶的一类蛋白质。近几年来 ,昆虫抗冻蛋白的研究取得了较快的发展 ,本文通过分析昆虫抗冻蛋白的结构特点、抗冻活性、作用机制 ,并讨论了抗冻蛋白在食品工业、医学、基因工程方面的应用。结果表明 ,昆虫抗冻蛋白虽然结构呈多样性 ,但有很多关键的残基具有保守性 ,对维持抗冻蛋白结构和功能的完整性发挥着重要的作用 ;抗冻蛋白是由多基因家簇编码的。其作用机制主要是吸附 -抑制机制 ,抗冻蛋白依靠氢键吸附到冰晶格 ,抑制冰晶生长 ;昆虫抗冻蛋白的应用具有很广阔的前景

有机溶剂/水两液相体系中甾体激素的生物转化

对有机溶剂 /水两液相体系中甾体激素的生物转化进行了综述 ,主要包括有机溶剂 /水两液相体系中甾体生物转化的特征、有机溶剂的选择、细胞的固定化、影响甾体激素转化率的因素以及反应器的设计等。